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《慢性應(yīng)激老年抑郁大鼠海馬ca3區(qū)c》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、慢性應(yīng)激老年抑郁大鼠海馬CA3區(qū)c作者：張紅衛(wèi) 侯安繼 胡艷 周維 唐志佼【摘要】 目的探討慢性應(yīng)激老年抑郁大鼠海馬CA3區(qū)c-fos和caspase-3蛋白的表達(dá)，以探討老年抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。方法將20只ethods20geratic2145輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)。1.5主要試劑兔抗大鼠c-fos多克隆抗體（美國(guó)SantaCruz公司提供）；兔抗大鼠caspase-3多克隆抗體（武漢博士德公司提供）；SP試劑盒（美國(guó)ZYMED公司產(chǎn)品，北京中山生物技術(shù)有限公司分裝）。1.6動(dòng)物處理于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后1天，再次進(jìn)行開場(chǎng)行為測(cè)定并稱重，然后用戊巴比妥快速麻醉動(dòng)物，開胸，經(jīng)左心室快速灌注37℃
2、生理鹽水約200ml,再灌注中性甲醛200～300ml，斷頭，取腦組織修塊，置于10%中性福爾馬林溶液中固定。1.7常規(guī)石蠟切片(厚4～5μm)HE染色染色結(jié)果：普通光鏡下可見，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)呈淡紅色。x【摘要】 目的探討慢性應(yīng)激老年抑郁大鼠海馬CA3區(qū)c-fos和caspase-3蛋白的表達(dá)，以探討老年抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。方法將20只ethods20geratic2145輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)。1.5主要試劑兔抗大鼠c-fos多克隆抗體（美國(guó)SantaCruz公司提供）；兔抗大鼠caspase-3多克隆抗體（武漢博士德公司提供）；SP試劑盒（美國(guó)ZYMED公司產(chǎn)品，北京中山生物
3、技術(shù)有限公司分裝）。1.6動(dòng)物處理于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后1天，再次進(jìn)行開場(chǎng)行為測(cè)定并稱重，然后用戊巴比妥快速麻醉動(dòng)物，開胸，經(jīng)左心室快速灌注37℃生理鹽水約200ml,再灌注中性甲醛200～300ml，斷頭，取腦組織修塊，置于10%中性福爾馬林溶液中固定。1.7常規(guī)石蠟切片(厚4～5μm)HE染色染色結(jié)果：普通光鏡下可見，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)呈淡紅色。1.8免疫組化染色［5］切片脫蠟入水，蒸餾水洗2次×3min；用0.01MpH6.0檸檬酸緩沖液抗原修復(fù)，微波處理，解凍檔5～6min；滴加3％H2O2,37℃，10min；滴加血清封閉，37℃，15min；滴加一抗（一抗稀釋度為c-fo
4、s1：100,caspase-31:50），37℃，2h；PBS洗3次×3min；滴加生物素化的羊抗兔IgG，37℃，20min；PBS洗3次×3min；滴加標(biāo)有辣根過氧化物酶的鏈酶親和素，37℃，20min；PBS洗3次×3min；DAB顯色；蘇木素復(fù)染核；中性樹膠封片。同時(shí)用已知的陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照,以PBS取代一抗做陰性空白對(duì)照。光鏡下觀察，c-fos陽(yáng)性表達(dá)神經(jīng)元為胞核呈棕黃色，核仁不著色；caspase-3陽(yáng)性表達(dá)神經(jīng)元為胞漿和胞膜呈棕黃色。1.9圖像分析采用圖像分析儀，每張切片選取海馬CA3區(qū)四周及中央?yún)^(qū)域，200倍鏡下測(cè)定其c-fos和caspase-3蛋白的陽(yáng)
5、性細(xì)胞數(shù)，平均灰度值等指標(biāo)，各取平均值作為這張切片的值。由同一人用同一臺(tái)儀器測(cè)定。1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1體重和開場(chǎng)行為評(píng)定見表1。從表1可以看出,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前開場(chǎng)行為和體重差異無顯著性(P>0.05),實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后開場(chǎng)行為中,除糞便粒數(shù)外,各指標(biāo)差異有顯著或非常顯著性(P<0.05或P<0.01),體重也較實(shí)驗(yàn)前減輕(P<0.05);對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后開場(chǎng)行為也有部分改變(P<0.05或P<0.01),體重較實(shí)驗(yàn)前增加(P<0.01
6、);實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組于實(shí)驗(yàn)后比較,除修飾次數(shù)差異無顯著性,其余各指標(biāo)對(duì)照組都優(yōu)于實(shí)驗(yàn)組(P<0.05或P<0.01)。2.2c-fos和caspase-3蛋白的圖像分析結(jié)果見表2。從表2可見，c-fos蛋白的圖像分析結(jié)果中，平均灰度值兩組比較差異有非常顯著性（P=0.000），兩組陽(yáng)性單位數(shù)比較，P=0.000,說明實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在c-fos的表達(dá)上存在明顯的差異。caspase-3的圖像分析結(jié)果中，平均灰度值和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異均有極顯著性（P=0.000）,說明慢性應(yīng)激老年大鼠c-fos、caspase-3蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組有顯著增強(qiáng)。表2c-fos
7、和caspase-3蛋白的圖像分析結(jié)果注:與對(duì)照組比較,P=0.000。2.3c-fos、caspase-3蛋白免疫組化染色見圖1～8。圖1～4為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組c-fos蛋白免疫組化光鏡照片，以胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒視為陽(yáng)性細(xì)胞，結(jié)果可見，在相同觀察條件下，實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組顯著增多，提示慢性應(yīng)激狀態(tài)下老年大鼠c-fos蛋白表達(dá)較正常組有明顯增強(qiáng)。圖5～8為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組caspase-3免疫組化光鏡照片，以胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒視為陽(yáng)性細(xì)胞，在相同觀察條件下，可見實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組顯著增多，同
