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1、石蠟切片技術(shù)在螳蟲形態(tài)學(xué)中的應(yīng)用李凌平（摘要）石蠟切片不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)科用以研宄，觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也己相當(dāng)廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研宄中.教學(xué)中，光鏡下觀察切片標(biāo)木多數(shù)是石蠟切片法制備的?！碴P(guān)鍵詞）石蠟切片生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)應(yīng)用1石蠟切片技術(shù)的流程取材-固定-沖洗-脫水-透明-浸蠟-埋-切片-染色-封蠟1.1取材：從蝗蟲中取出要切片的部分，材料要求新鮮，分別運(yùn)用橫切法或縱切法切取要研究的部分，材料大小一般在3乘3乘2立方毫。1.2固定：將取出的材料立即投入固定的液中，目的
2、是防止組織腐敗和自溶，是它保持原有的結(jié)構(gòu)。在木試驗(yàn)中所用的固定液是Bouin氏液，固定的時(shí)間須8小時(shí)左右。1.3沖洗：固定的材料一般要經(jīng)過沖洗，目的在于洗去標(biāo)木中過剩的固定液，以免沉漬于材料中影響制片和染色。一般用70%的酒精沖洗數(shù)次直至除去黃色為止。1.4脫水：為使組織能完全包埋于石蠟中切成薄片，組織經(jīng)固定水洗后，必須先讓它完全脫去水分。1.5透明：將脫水后的組織塊移入100%酒精與二甲苯混合液（體積1:1）10-20分鐘后，換入純的二甲苯液30-40分鐘，直到組織透明為止。觀察組織塊是否透明，可對(duì)著光觀察，組織呈糖飴的顏色或透明狀
3、即可。1.6浸蠟：將己透明的組織塊浸入透明劑與石蠟（體積比1:1）的混合液中20-30分鐘，然后移入己溶的純石蠟I,純石蠟II各一小時(shí)，逐步除去透明劑，使石蠟浸入組織塊的各個(gè)部分，便于以后進(jìn)行切片。在浸蠟過程需在恒定的60攝氏度溫箱中進(jìn)行。1.7包埋：包埋方法可以用染色缸蓋包埋，也可以折一個(gè)小紙盒包埋，大小隨組織塊的體積而定，也可以用金屬鑄成的無底包埋框，下面放一白瓷磚包埋。包埋前準(zhǔn)備一盆冷水，一把鑷子，一把小燙蠟鏟，一個(gè)灑精燈，一支玻璃管;包埋吋在紙盒或其他容器上涂上一層薄甘油，然后倒入融化的石蠟，用鑷子在酒精燈上稍加熱，輕輕將組織
4、塊和標(biāo)簽夾入紙盒或包埋框內(nèi)，將要切的面朝下擺正位置待蠟完全凝固后，剝?nèi)ゼ埡谢虬窨?，保存蠟塊待進(jìn)一步切片。1.8切片：切片前需要修整好蠟塊，并將它固定在木塊上，把每一小塊蠟修成長(zhǎng)方體。1.9染色：將切片放入二甲苯內(nèi)5-10分鐘，1.10封蠟：切片上以中性樹膠，然后覆蓋上蓋玻璃片，標(biāo)本即可長(zhǎng)期保。2試劑的配制2.1酒精的配制。取95%酒精75毫升，加A20毫升水得到95毫升，75%的酒精溶液,取95%酒精80毫升，加入10毫升水得到95毫升，80%的灑精溶液，由此可知，定容到95毫升，用95%灑精作原料，取多少95%灑精,便可得到百分之
5、多少的酒精溶液。此法可配制酒精濃度梯度。2.2H.E染色劑的配制。取伊紅1克溶于5毫升蒸餾水中，待全部溶解后，將冰醋酸逐滴加入其溶液中，邊攪拌，直到沉淀形成為止，再加2毫升蒸餾水，繼續(xù)滴加冰醋酸，使沉淀不再增加為止。2.3Bouin’s固定液的配制?？辔端崴芤?5毫升，甲醛水溶液25毫升，冰醋酸5毫升。3試驗(yàn)中應(yīng)當(dāng)注意的問題3.1脫水。脫水過程中出現(xiàn)的問題主要是脫水不浄和過度硬化，脫水不浄吋二甲苯不能滲入，蠟液不能滲入組織，可導(dǎo)致切片閑難，切出的片子在染色時(shí)易脫片。而組織蠟塊與空氣接觸后也會(huì)因水分蒸發(fā)而凹陷，故脫水吋一定
6、要保證脫水液濃度達(dá)標(biāo)，經(jīng)常更換新液，遇脂肪組織或疏松的纖維組織宜加長(zhǎng)脫水吋間。3.2透明。二甲苯是最常見的透明劑，但其收縮性強(qiáng)，極易是組織變脆，故在這一過程中要嚴(yán)加控制，一般30分鐘就可以達(dá)到透明的程度，但溫度較低吋可適當(dāng)延長(zhǎng)吋間或置于溫箱中加熱，另外在透明過程中還要注意更換二甲苯，有時(shí)其至更換兩三次以上，每次10分鐘左右，若二甲苯為舊液體，應(yīng)選擇多的更換次數(shù)。3.3浸蠟和包埋。浸蠟和包埋要一次完成，要盡量在恒溫下操作，防止中間出現(xiàn)溫度差。蠟的溫度要適宜，不能過高使組織燙壞或使碎小組織變脆和變硬，也不能溫度過低使組織與石蠟脫離，蠟塊中
7、不能出現(xiàn)氣泡，裂隙和斑點(diǎn)。對(duì)于碎小組織要盡可能使其處于同一平面，否則會(huì)造成切片不全與漏切，此時(shí)要盡可能使碎小組織下沉，并防止其重疊。3.4切片。手工切片時(shí)，用力要均勻一致，不宜過重過猛，容易造成切片厚薄不均，甚至毀壞蠟塊。為保持蠟塊硬度，可把蠟塊放于冰柜中，切吋取出，組織蠟塊四周在切片前應(yīng)修齊，大小適當(dāng)，切片機(jī)要放穩(wěn)，不能震動(dòng),切片刀要放置好，傾斜角要大小適宜，一般以20—30為宜。3.5染色。染色過程中出現(xiàn)的總是較多，除了要防止染色效果不佳外，還要注意不能脫水。為此首先要注意染色液的配制濃度要準(zhǔn)確，pH值要適當(dāng)，且不能有沉淀。染色前
8、切片脫蠟要徹底。染色吋間要跟據(jù)染液的新舊適當(dāng)調(diào)整，必要吋在染色過程中用顯微鏡觀察，染色過程中避免陽光照射，水沖洗不宜太猛。3.6封固。切片封固不良，易出現(xiàn)色素顆粒，氣泡，云霧狀物等，其原因大致為：封固吋二甲苯己揮發(fā)完畢，
