cox2抑制劑聯(lián)合順鉑或x射線對a549肺腺癌細胞株的體外實驗

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1、COX2抑制劑聯(lián)合順鉑或X射線對A549肺腺癌細胞株的體外實驗作者：熊建萍,陶慶松,張凌,徐俊,項小軍,李思明,張錫泉,盧珊【摘要】目的觀察環(huán)氧化酶2(COX2)抑制劑塞來昔布(Celecoxib)聯(lián)合化療藥物順鉑(DDP)或聯(lián)合X射線對A549人肺腺癌細胞增殖的影響及可能機制。方法應用MTS法分別檢測Celecoxib與DDP聯(lián)用對A549細胞增殖的影響及聯(lián)合X射線對A549細胞存活分數(shù)(SF)的影響，流式細胞術檢測細胞凋亡。結果在一定濃度范圍內(nèi)，Celecoxib和DDP均可抑制A549人肺腺癌細胞的生長，其抑制作用呈量效關系。兩

2、者聯(lián)用可增強對A549細胞生長的抑制作用，DDP濃度≥1mg/L時兩者具有協(xié)同或相加作用。Celecoxib與X射線聯(lián)用可顯著降低細胞存活分數(shù)(SF)，增加細胞凋亡率。結論Celecoxib與DDP聯(lián)合可增強對A549人肺腺癌細胞的生長抑制效應；Celecoxib與X射線聯(lián)合時，可增加A549人肺腺癌細胞的凋亡率，增強其對放射的敏感性?！娟P鍵詞】肺癌;環(huán)氧化酶2;體外實驗;凋亡;X射線基金項目：江西省科技廳自然基金課題資助　　TheDepressiveEffectofDetectedontheProliferationofA549HumanL

3、ungAdenocarcinomaCellLinesandCelecoxibbinedanlungadenocarcinomacells.MethodsThedepressiveeffectontheproliferationofA549cellsetry.ResultsEM培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2、95%濕度CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。待細胞呈對數(shù)生長，即用0.25%的胰蛋白酶溶液消化，分瓶并擴大培養(yǎng)。　　1.1.2主要試劑及儀器　　Celecoxib(昆山化工醫(yī)藥原料有限公司)，化學結構式為C17H14F3N3O2S，25℃溶于二甲亞砜(D

4、MSO)；DDP(云南個舊生物藥業(yè)有限公司)。其他主要試劑儀器包括MTS/PMS(Promega)、酶聯(lián)免疫檢測儀、流式細胞儀和電子直線加速器(瑞典依科達公司)?！　?.1.3藥物濃度參照其常用劑量在人體達到的血漿峰濃度，選擇其血漿峰濃度的1/4～1/10倍范圍，順鉑血漿峰濃度為2mg/L，Celecoxib血漿峰濃度為0.7mg/L。　　1.2方法　　1.2.1Celecoxib與DDP聯(lián)合對A549細胞的影響　　MTS法檢測細胞生長抑制。取96孔無菌培養(yǎng)板一個，每孔加入含有2×105/ml腫瘤細胞的DMEM細胞懸液100μl。設空白組(只

5、含等量溶劑)、Celecoxib組、順鉑組及聯(lián)合組，每組3復孔，于37℃、5%CO2，飽和濕度條件下培養(yǎng)6h。腫瘤細胞完全貼壁后，實驗組中分別加入不同濃度的干預藥物，使DDP終濃度分別為0.5、1.0、2.0、4.0和8.0mg/L；Celecoxib終濃度分別為0.175、0.35、0.7、1.4和2.8mg/L；聯(lián)合組Celecoxib濃度為0.35mg/L。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，每孔加入MTS/PMS混合液20μl培養(yǎng)2h，應用酶標儀,于492nm波長處測光吸收(OD)值。根據(jù)公式計算細胞生長抑制率(E)：E=1－實驗組平均OD值/對照組平

6、均OD值×100%。按下式計算Q值并判斷兩藥的聯(lián)合效應[7]：Q=E(A+B)/[EA+(1－EA)×EB]，其中，E(A+B)為兩藥合用的抑制率，EA、EB為兩藥單用的抑制率。Q為0.85～1.15表示兩藥作用相加，Q＞1.15表示兩藥作用協(xié)同，Q＜0.85表示兩藥作用相互拮抗。上述實驗重復3次。　　1.2.2Celecoxib與X射線聯(lián)合對A549細胞的影響　　1.2.2.1X線照射條件　　細胞在室溫下，直線加速器6MVX線、SSD照射，加2cm標準等效填充物(2cm厚有機玻璃板)，平均劑量率200cGy/min?！　?.2.2.2MT

7、S法檢測存活分數(shù)　　取24孔培養(yǎng)板一個，設4Gy照射組及4Gy＋Celecoxib聯(lián)合組，每組3復孔，按上述接種方法，每孔加入含有2×105/ml腫瘤細胞的DMEM細胞懸液100μl及DMEM完全培養(yǎng)基400μl；另取24孔培養(yǎng)板一個，設空白對照組3復孔，每孔加入細胞懸液100μl及DMEM完全培養(yǎng)基400μl，于37℃、5%CO2，飽和濕度條件下培養(yǎng)6h?？瞻讓φ战M加入DMEM完全培養(yǎng)基500μl，聯(lián)合組經(jīng)不同濃度Celecoxib500μl處理，1h后經(jīng)X線照射，繼續(xù)培養(yǎng)5d，MTS法檢測OD值，按下式計算存活分數(shù)（SF）：SF＝實驗組平

8、均OD值/對照組平均OD值×100%?！　?.2.2.3流式細胞術檢測細胞凋亡　　取對數(shù)生長期的A549細胞1×106/ml接種于培養(yǎng)瓶中，24h后換液。分為單純照