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1、蜂膠中總黃酮的分離及其含量測(cè)定論文【摘要】目的利用聚酰胺柱層析分離蜂膠中總黃酮，并運(yùn)用紫外分光光度法(UV)對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。方法利用聚酰胺柱層析，干法上樣，分別用30％、95％不同濃度的乙醇進(jìn)行洗脫，鹽酸—鎂粉反應(yīng)定性檢測(cè)及分光光度法定量測(cè)定，并對(duì)分光光度法進(jìn)行了改進(jìn)。結(jié)果經(jīng)定性檢測(cè)，30％乙醇洗脫液幾無(wú)黃酮，紫外分光光度法測(cè)量95％洗脫液中總黃酮的含量為0.956mg/ml。結(jié)論利用聚酰胺柱層析初步純化蜂膠中總黃酮,并提供了測(cè)量蜂膠中總黃酮含量的一種快速、準(zhǔn)確的方法—紫外分光光度法.freelinationofFlavonoidsinProplisGAOX
2、iu-rong，ZANentofPharmacy,ChengduMedicalCollege,Chengdu610083China)Abstract：ObjectiveToseparatetheflavonoidsinproplisbypolyamidecolumnchromatographyandtoestablishthemethodofUVfordeterminationofflavonoid.MethodsFlavonoidofproplisidecolumnchromatographyinedbyHd-Mgreactionandultraviolet
3、-visiblespectrophotometry.ResultsThereostnoflavonoidineluateof30%ethanol,theconcentrationofeluateof95%ethanolg/mlbyU-VSpectrophotometry.ConclusionTheflavonoidarilypurifiedbypolyamidecolumnchromatography,andafast,accuratemethod—ultraviolet-visiblespectrophotometryidecolumnchromatogra
4、phy;ultraviolet-visiblespectrophotometry蜂膠（proplis）是蜜蜂從植物樹芽、花苞和樹干處采集的樹膠，并混入蜜蜂上顎腺分泌物和蜂蠟等成分而成的一種具有芳香氣味的褐色膠狀固形物。蜂膠的化學(xué)成分極為復(fù)雜，其主要活性成分包括黃酮類、萜烯類、有機(jī)酸、芳香醛、酯類及多種氨基酸、酶、維生素、礦物質(zhì)等［1］。黃酮類是蜂膠中最主要的活性物質(zhì)，具有抗癌，治療糖尿病，抗菌，抗病毒，抗氧化，調(diào)節(jié)免疫等多種功能。蜂膠中的黃酮類成分有上百種，但到目前為止僅分離了30多種。為了更加明確蜂膠的有效成分，更加有效地利用蜂膠，本文利用聚酰胺柱層析分離蜂
5、膠中的總黃酮，并運(yùn)用分光光度法進(jìn)行了含量測(cè)定。1材料與方法1.1主要試劑和儀器1.1.1儀器北京市朝陽(yáng)區(qū)來(lái)廣營(yíng)醫(yī)療器械廠GD65-1型鼓風(fēng)干燥箱；上海良平儀器儀表有限公司YB電子天平；上海滬西分析儀器廠DHL-A電腦恒流泵；安捷倫科技上海分析儀器有限公司751Gl,80ml,60ml(每次45min),提取液合并，減壓濃縮，得總浸膏7.0g。利用聚酰胺柱色譜粗分，用95％乙醇洗去吸附劑中的醇溶性雜質(zhì)，干法上樣，分別用30％和95％乙醇洗脫，鹽酸—鎂粉反應(yīng)，30％洗脫液呈陰性，95％洗脫液呈陽(yáng)性，證明30％洗脫液中幾無(wú)黃酮，95％洗脫液中為總黃酮，為供試液。1.
6、2.2運(yùn)用分光光度法測(cè)定供試液中總黃酮的含量1.2.2.1標(biāo)準(zhǔn)液的配制精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20mg，置100ml容量瓶中，80％乙醇溶解，定容，即得0.2mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。1.2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于10ml容量瓶中，加5％NaNO2試液0.4ml，搖勻，靜置6min，加10％Al(NO3)30.4ml，靜置6min，加4％NaOH4.0ml，用蒸餾水補(bǔ)足，搖勻。另分別吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于10ml容量瓶中，蒸餾水定容，分別作為上述6管的空白對(duì)照
7、（即加相同量的蘆丁，不加顯色劑作為空白對(duì)照）；放置15min，510nm處比色。以濃度（C）與吸光度（A）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=12.491C－0.0025，R=0.9992。1.2.2.3測(cè)定樣品含量精密吸取供試品溶液0.5ml，置10ml容量瓶中，以供試液為空白對(duì)照，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法顯色，平行測(cè)定5次，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試液中總黃酮含量。結(jié)果見表１。1.2.2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)吸取供試液適量，按標(biāo)準(zhǔn)表195％乙醇洗脫液中總黃酮的含量曲線項(xiàng)下方法在5min，10min，15min，20min時(shí)測(cè)定，以確定供試液的穩(wěn)定性。1.2.2.5精密性實(shí)驗(yàn)吸取供
8、試液適量，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法重復(fù)測(cè)定5
