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1、酶聯(lián)免疫吸附法檢測HBV抗【摘要】目的鑒別并糾正酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測乙型肝炎抗-HBc過程中出現(xiàn)的假陽性結(jié)果。方法在乙型肝炎“兩對半”臨床檢測標(biāo)本中隨即挑選抗-HBc陽性的標(biāo)本310份，根據(jù)“兩對半”檢測結(jié)果的不同模式分為三組：A組HBs-Ag（+）、抗-HBs（-）、HBeAg或抗-HBe（+）、抗-HBc（+）；B組HBs-Ag（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗-Hbe（+或-）、抗-HBc（+）；C組其他模式。標(biāo)本經(jīng)高速離心（5000g,10min），然后分別用科華公司和榮盛公司的試劑（均為ELISA法）復(fù)查抗-HBc。結(jié)果在310份標(biāo)本（A組153份，
2、B組96份，C組61份）中用科華公司的試劑檢測到抗-HBc陽性標(biāo)本241份，用榮盛公司的試劑檢測到抗-HBc陽性標(biāo)本249份，二者符合率為94.8%。其中57份標(biāo)本用兩種試劑復(fù)查后抗-HBc均為陰性，其中A組2份，B組49份，C組6份。分別占各組的1.3%、51.0%和9.8%。結(jié)論用ELISA競爭法檢測抗-HBc，由于非特異吸附和操作等原因易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，尤其對于抗-HBs和抗-HBc同時陽性的標(biāo)本應(yīng)該復(fù)查抗-HBc?！娟P(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附實驗抗-HBc乙型肝炎假陽性近年來乙型肝炎血清標(biāo)志檢測多用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）競爭法（一步法），由于方法簡便，速度快而備受歡迎。但是
3、用該方法進行抗-HBc批量檢測常常出現(xiàn)假陽性［1］。我們對310份抗-HBc陽性的標(biāo)本進行了復(fù)查，現(xiàn)報告如下。1材料與方法1.1試劑HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc常規(guī)批量檢測試劑盒均購自科華生物技術(shù)有限公司。HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg檢測試劑盒為“夾心法”，抗-HBe和抗-HBc檢測試劑盒為“競爭法”?？?HBc復(fù)查試劑盒分別購于科華生物技術(shù)有限公司和上海榮盛生物技術(shù)有限公司，為“競爭法”。1.2方法常規(guī)檢測：采集靜脈血，在標(biāo)本凝固后離心（3000g,5min），乙肝“兩對半”五項指標(biāo)同時批量檢測，HBs-Ag、抗-HBs、HBeAg、抗-HB
4、e和抗-HBc五塊板條同時加入待檢血清，標(biāo)本全部加入約需30min，然后再加入酶標(biāo)記的相應(yīng)抗體，即酶標(biāo)抗體的加入滯后于血清標(biāo)本約30min。其余步驟嚴(yán)格按說明書操作?？?HBc復(fù)查實驗：每次“兩對半”常規(guī)檢測后，挑選抗-HBc陽性的標(biāo)本，高速離心（5000g,10min），然后分別用科華生物技術(shù)有限公司和上海榮盛生物技術(shù)有限公司的試劑盒復(fù)查抗-HBc，嚴(yán)格按說明書操作?；颈ＷC血清與酶結(jié)合物同時加入。1.3標(biāo)本上海市吳涇醫(yī)院2006年3～6月乙肝“兩對半”檢測標(biāo)本，其中抗-HBc陽性標(biāo)本310份，根據(jù)不同模式分為三組：A組HBs-Ag（+）、抗-HBs（-）、HBeAg或抗-HBbe
5、（+）、抗-HBc（+），共153份；B組HBs-Ag（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗-HBe（+或-）、抗-HBc（+），共96份；C組其他模式，61份。2結(jié)果2.1310份標(biāo)本分別用兩種方法復(fù)查抗-HBc的結(jié)果在310份標(biāo)本（A組153份，B組96份，C組61份）中用科華公司的試劑檢測到陽性標(biāo)本241份，用榮盛公司的試劑檢測到陽性標(biāo)本249份，二者符合率為94.8%。其中57份標(biāo)本用兩種試劑復(fù)查后均為陰性，占18.4%。結(jié)果見表1。表1310份標(biāo)本分別用兩種方法表1中，兩種復(fù)查實驗同時陰性的標(biāo)本視為常規(guī)檢測中抗-HBc假陽性，假陽性率18.4%，兩種復(fù)查實驗結(jié)果的復(fù)
6、合率94.8%。2.2三組標(biāo)本復(fù)查抗-HBc的結(jié)果在310份抗-HBc陽性標(biāo)本中，A組153份，復(fù)查后2份為陰性；B組96份，復(fù)查后49份為陰性；C組61份，復(fù)查后6份為陰性。見表2。表2三組標(biāo)本復(fù)查抗-HBc的結(jié)果3討論ELISA競爭法（一步法）檢測抗-HBc抗體，由于用多克隆抗-HBc和HBcAg包被反應(yīng)板，加入待檢標(biāo)本和酶標(biāo)記的單克隆抗-HBc，競爭結(jié)合HBcAg，如果酶標(biāo)抗體的加入滯后于待檢標(biāo)本，很容易出現(xiàn)非特異性吸附，導(dǎo)致假陽性［1］。在“兩對半”檢測的實際操作中，如果用手工操作進行批量檢測，五塊板（96孔）全部加入標(biāo)本約需要30min。然后再加入相應(yīng)的酶標(biāo)記抗體，酶標(biāo)抗-
7、HBc的加入滯后于待檢標(biāo)本，致使標(biāo)本中非特異抗體吸附到包被的HBcAg，而阻礙酶標(biāo)抗-HBc的結(jié)合，出現(xiàn)假陽性。我們對310份抗-HBc陽性標(biāo)本進行復(fù)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)57份為假陽性，假陽性率18.4%。尤其是“兩對半”結(jié)果為HBsAg（-）、抗-HBs（+）、HBeAg（-）、抗-Hbe（+或-）、抗-HBc（+）模式的標(biāo)本，抗-HBc假陽性率高達51.0%。對于抗-HBs陽性者，抗-HBc陽性與否其臨床結(jié)果明顯不同，因為抗-HBs和抗-HBc同時陽性可能為急
