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1、bFGF在局灶性腦缺血再灌注大鼠肝臟中表達(dá)的研究論文李雅娜孫研李笑巖蔡磊高菲王偉善【摘要】目的研究堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgroiareperfusioninrats.MethodsFocalcerebralischemiaandreperfusionratmodeliddlecerebralarteryocclusionbyusingthreadinserting.Reperfusionia.After48hoursoftheoperation,thesamplesic
2、roscopy.TheexpressionofbFGFmunohistochemistryandparedoperation.ResultsThelivercellsinmodelgroupeofthelivercellsoccurredfattychangedandinflammatorycellsinfiltratedoftheportalareas.Thehepaticsinusoidbecamenarrooperatedgroup.TheexpressionofbFGFodelgroupth
3、anthatinShamoperatedgroup.ConclusionThestudyindicatedthatbFGFotelivertissuerepairaftercerebralischemiareperfusion.【Keyia,reperfusion,liver,bFGF,rats組織或器官在一定時(shí)間缺血缺氧后會(huì)造成損傷，血供恢復(fù)后損傷會(huì)進(jìn)一步加重稱為缺血再灌注損傷（IRI），其中腦缺血再灌注損傷最為常見(jiàn)。腦缺血再灌注損傷是一個(gè)復(fù)雜的病理生理過(guò)程，除導(dǎo)致腦組織病變外，機(jī)體多臟器可同時(shí)受
4、累，肝臟作為最易受累的器官之一，在臨床和實(shí)驗(yàn)中受到人們的高度重視，但其機(jī)制還不完全清楚［１，２］。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgroi等［４］線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)模型。取直徑為0.2mm、長(zhǎng)5cm的尼龍漁線，一端近火將其燒成直徑為0.24mm的球形，使之變成規(guī)格一致、頭端光滑的栓線，在距栓線頭端18mm、28mm的位置以記號(hào)筆標(biāo)記。使用前依次用75%乙醇、肝素鈉注射液浸泡。大鼠腹腔注射3.5%水合氯醛(1ml/100g)麻醉后，將其仰臥于手術(shù)臺(tái)上，固定四肢
5、及頭部，墊高頸部，取頸部正中切口2cm，顯露左側(cè)胸鎖乳突肌，鈍性分離左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎頸總動(dòng)脈近心端，并于此結(jié)扎線的上方穿線備用，注意避免損傷迷走神經(jīng)，再結(jié)扎頸外動(dòng)脈，以動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉頸總動(dòng)脈分叉處，在距動(dòng)脈夾約1cm的近心端剪一“V”形小口，將栓線插入，栓線到達(dá)動(dòng)脈夾處時(shí)以備用線將其扎住以免滑脫。向外側(cè)輕拉頸外動(dòng)脈結(jié)扎線，栓線沿內(nèi)上方角度插入，以便順利進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，避免誤入翼腭動(dòng)脈。栓線前端到達(dá)大腦前動(dòng)脈處遇阻力時(shí)止，提示線已阻塞大腦中動(dòng)脈，此時(shí)所做的第一個(gè)標(biāo)記到達(dá)頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)
6、動(dòng)脈分叉處，第二個(gè)標(biāo)記到達(dá)“V”形切口處。剪斷多余的結(jié)扎線，縫合切口，缺血2h后輕拔栓線皮膚外的殘端，至有阻力時(shí)提示線的頭端已至頸外動(dòng)脈，拔出約0.5cm，實(shí)現(xiàn)再灌注。術(shù)中及術(shù)后環(huán)境溫度調(diào)節(jié)在25～30℃左右，密切注意生命體征。1.4動(dòng)物篩選大鼠麻醉清醒后按Longa等［５］5分制方法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。0分：無(wú)神經(jīng)損傷癥狀，活動(dòng)正常；1分：輕微神經(jīng)功能缺損，不能完全伸展右側(cè)前肢；2分：中度局灶性神經(jīng)功能缺損，行走時(shí)向右側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分：重度局灶性神經(jīng)功能缺損，行走時(shí)向右側(cè)傾倒；4分：不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失
7、。其中得分在1～3分者被認(rèn)為模型制作成功，納入實(shí)驗(yàn)。并設(shè)假手術(shù)組，僅模擬手術(shù)，不阻塞大腦中動(dòng)脈，每組各10只大鼠。1.5肝組織病理學(xué)觀察術(shù)后48h，大鼠以3.5%水合氯醛麻醉后，解剖分離肝臟，生理鹽水沖凈，浸入4%多聚甲醛溶液中固定12h，修整組織塊，PBS沖洗6h，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，5μm厚度切片，行HE染色，光鏡下觀察其組織病理學(xué)改變。1.6免疫組織化學(xué)染色石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，3%過(guò)氧化氫溶液37℃30min，蒸餾水沖洗后微波修復(fù)；PBS漂洗3次，滴加10%山羊血清封閉液，37
8、℃孵育30min；滴加兔抗bFGF單克隆抗體(1∶400)，4℃孵育過(guò)夜；PBS漂洗3次，滴加生物素化羊抗兔IgG(1∶200)，37℃孵育30min；PBS漂洗3次，DAB顯色液顯色5min；蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，光鏡觀察。陰性對(duì)照以PBS代替一抗，其余步驟相同。2結(jié)果2.1MCAO模型組大鼠生理行為及腦組織變化MCAO模型組大鼠出現(xiàn)左側(cè)Horner’s征陽(yáng)性(即左側(cè)眼球下陷，眼裂變小)，不能伸右前肢；提尾時(shí)，右前肢內(nèi)收屈
