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1、奧曲肽對(duì)人卵巢癌細(xì)胞增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的探討生長(zhǎng)抑素類似物奧曲肽（OCT）在體內(nèi)對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3生長(zhǎng)的影響。方法建立人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3裸鼠移植瘤模型，隨機(jī)分成4組：對(duì)照組、奧曲肽組、順鉑組及奧曲肽順鉑聯(lián)用組，分別予生理鹽水、奧曲肽、順鉑及兩藥聯(lián)用處理，處死裸鼠后腫瘤標(biāo)本采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)。結(jié)果各用藥組瘤重、瘤體積、VEGF的表達(dá)均低于生理鹽水組（P<0.05）,但用藥組兩兩間比較差異無(wú)顯著性。結(jié)論奧曲肽能抑制體內(nèi)人卵
2、巢癌細(xì)胞株SKOV3生長(zhǎng)，對(duì)腫瘤VEGF表達(dá)的抑制可能為其抑瘤機(jī)制之一?！娟P(guān)鍵詞】奧曲肽；卵巢癌；細(xì)胞周期；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Effectofoctreotideonthegroanovariancancercelllineinexperimentalstudy【Abstract】ObjectiveToapproachtheeffectofoctreotideonthegroanovariancancercelllineSKOV3invivo.MethodsMetastaticmodelsimulatinghu
3、manovariancancerplantationoftheovariancancercelllineSKOV3intonudemice.Animalslydividedandsubmittedtodifferenttreatmentgroups:controlgrouptreatedalsaline，octreotidegroupiceorsamplesinedbyfloetry，VEGFexpressioninedbyimmunohistochemistryoreandtheexpressionofVE
4、GFicethaninthecontrolmice(P<0.05)，butthereanovariancancercelllineSKOV3invivo，themechanismmaybedoatostatin,SST)是一種環(huán)狀多肽類激素,由Brazeau等［1］于1973年從羊下丘腦中分離提取。現(xiàn)在認(rèn)為SST對(duì)許多疾病如腫瘤、炎癥、糖尿病、癲癇、早老性癡呆、帕金森病、亨廷頓舞蹈病以及艾滋病的發(fā)生、發(fā)展以及防治具有重要的意義［2］。奧曲肽(SMS-201995,OCT)為生長(zhǎng)抑素8肽類似物,是第一個(gè)用
5、于臨床的生長(zhǎng)抑素類似物，目前其主要用于肝癌、胃癌、胰腺癌的輔助治療。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于奧曲肽對(duì)卵巢癌作用的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)裸鼠移植瘤模型觀察奧曲肽對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3增殖的影響,并初探其作用機(jī)制。1材料與方法1.1材料(1)基礎(chǔ)培養(yǎng)液：RPMI1640，加入10%小牛血清(杭州四季青生物公司)。(2)胰蛋白酶(上海華美公司)：溶于D-Hanks液中配制成0.25%濃度。(3)生長(zhǎng)抑素類似物奧曲肽：由上海子能制藥有限公司合成。(4)順鉑(Cisplatin):山東齊魯制藥廠產(chǎn)品，4℃保存。(5)人卵巢癌
6、細(xì)胞株SKOV3：購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院婦產(chǎn)科實(shí)驗(yàn)室。細(xì)胞置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，0.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞成單細(xì)胞懸液。(6)雌性BALB/c-nu/nu裸小鼠：購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，體重18～22g，SPF環(huán)境下飼養(yǎng)。(7)兔抗人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）單克隆抗體：購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。1.2方法1.2.1卵巢癌裸鼠移植瘤模型的建立將SKOV3細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液,以5×106個(gè)細(xì)胞/只，接種于裸鼠右側(cè)腋窩靠近背部皮下，共接種20只。1.2.2藥物干預(yù)移植瘤建模2周
7、后將20只裸鼠隨機(jī)分成4組,每組5只，4組分別為空白對(duì)照組、奧曲肽組、順鉑組、奧曲肽與順鉑聯(lián)用組?？瞻讓?duì)照組皮下注射生理鹽水100μg/（kg·d），1次/d；奧曲肽組皮下注射奧曲肽100μg/（kg·d）,1次/d；順鉑組分別于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射順鉑4mg/kg；奧曲肽與順鉑聯(lián)用組皮下注射奧曲肽100μg/（kg·d）,1次/d,并于成瘤后第1、8、15、22日腹腔注射順鉑4mg/kg。用藥4周后頸椎脫位法處死裸鼠，皮下剝離瘤體，稱取腫瘤重量，游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑（a）和短徑（b），按公式
8、V=ab2/2計(jì)算腫瘤體積。抑瘤率=(對(duì)照組瘤體積-實(shí)驗(yàn)組瘤體積)/對(duì)照組瘤體積×100%。腫瘤標(biāo)本分為兩份，一份置于10％中性緩沖福爾馬林液中固定，常規(guī)脫水，透明，浸蠟，包埋，5μm連續(xù)切片。另一份立即制成單細(xì)胞懸液行流式細(xì)胞分析。1.2.3流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期腫瘤組織采用機(jī)械法分離，制備成濃度為1×106/ml的單細(xì)胞懸液，70％乙醇固定，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液，加200μlRNa
