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《midkine特異的shrna對胃腫瘤細(xì)胞bgc823增殖及凋亡的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、Midkine特異的shRNA對胃腫瘤細(xì)胞BGC823增殖及凋亡的影響作者：王慶苓，黃亞紅，柳紅，侯亞義【摘要】目的研究shRNA干擾midkine對胃腫瘤細(xì)胞BGC823增殖能力及凋亡的影響。方法構(gòu)建midkine基因的特異性小RNA干擾質(zhì)粒，采用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染BGC823細(xì)胞，運(yùn)用CCK-8檢測細(xì)胞的增殖能力，PI染色檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果成功轉(zhuǎn)染重組體的BGC823細(xì)胞增殖明顯受到抑制(P<0.01)細(xì)胞形成克隆數(shù)明顯降低(P<0.01)，并且有明顯的亞二倍體峰出現(xiàn)(P<0.05)。結(jié)論針對midkine基因的特異性小RNA干擾質(zhì)粒在體外能有效抑制人胃癌細(xì)胞
2、BGC823midkine表達(dá)，細(xì)胞增殖能力減弱，細(xì)胞凋亡增加，為midkine基因靶向治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】midkine;shRNA;胃腫瘤細(xì)胞;細(xì)胞增殖;細(xì)胞凋亡 Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofknockdoidkine(MK)expressionbyshRNAoncellproliferationandapoptosisofhumangastriccarcinomacellBGC823.MethodsSpecificshRNAplasmidstomidkinein2000.Thecellproliferatio
3、ninedbyfloetricanalysis.ResultsTherebinantplasmidexpressingmidkineshRNAeffectivelyinhibitedBGC823cellproliferation(P<0.01)anddecreasedcloneformation(P<0.01)andsignificantlypromotedcellapoptosisergenceofsub-diploidpeak(P<0.05).ConclusionshRNAplasmidstargetingMKgenecaninhibitthegroangastr
4、iccancercellsbyattenuatingcellproliferationandinducingapoptosis,ightprovideexperimentalevidenceforgenetargetingtherapyofMK. Keyidkine;shRNA;gastriccancercell;cellproliferation;apoptosis Midkine(MK)是一種肝素結(jié)合生長因子，MK在多種正常組織中也有表達(dá)，在小腸黏膜組織高表達(dá)，在肺、結(jié)腸、胃、腎和脾低表達(dá)，在肝臟中沒有表達(dá)，MK在多種腫瘤組織中的表達(dá)比相應(yīng)的癌旁和正常組織高[1]。在我們前期研
5、究工作[2]中發(fā)現(xiàn)MK在中國胃腫瘤患者的腫瘤組織中高表達(dá)，并與臨床分級相關(guān)。在多種腫瘤細(xì)胞系中，MK具有促纖溶、促血管形成和抗凋亡作用，能誘導(dǎo)NIH/3T3細(xì)胞、SK水平都有所增加[4-5]，腫瘤切除后血清MK水平就會下降[6]。這些資料表明MK與胃腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，可作為診斷指標(biāo)和治療靶標(biāo)。本研究旨在以MK為靶標(biāo)進(jìn)行干擾，觀察MK干擾后胃腫瘤細(xì)胞增殖及凋亡情況?！ ?材料和方法 1.1材料 1.1.1腫瘤細(xì)胞BGC823細(xì)胞株購自中國科學(xué)院細(xì)胞所?！ ?.1.2pSilencer2.1U6和pSilencer3.1H1載體pSilencer2.1U6和pSilencer3.1H
6、1載體購自Ambion公司，pSilencer2.1U6的載體含有U6RNA聚合酶Ⅲ啟動子;pSilencer3.1H1載體含有H1RNA聚合酶Ⅲ啟動子。兩者都同時含有氨芐青霉素和G418抗性基因，前者可用于在原核細(xì)胞的篩選，后者則可用于在真核細(xì)胞的篩選。2個載體在購買時呈開環(huán)的線狀，兩端分別留有BamHI和HindⅢ的酶切位點(diǎn)。 1.1.3主要試劑PI為南京凱基生物公司產(chǎn)品;Llipofectamin2000轉(zhuǎn)染試劑和Opti-MEM購自Invitrogen公司;各種限制性內(nèi)切酶、總RNA提取試劑盒、質(zhì)粒抽提試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、核酸電泳試劑均為TaKaRa公司產(chǎn)品;PCR擴(kuò)增試劑
7、為天為時代公司產(chǎn)品?！ ?.2方法 1.2.1發(fā)夾狀雙鏈MK-siRNA基因序列的合成根據(jù)前面研究中MK-siRNA序列[7]設(shè)計(jì)發(fā)夾雙鏈RNA基因序列，正義鏈：5′GATCCGTGAAGAAGGCGCGCTACAATGCTCATTCAAGAGATGAGCATTGT AGCGCGCCTTCTTCATTTTTTGGAAA′;反義鏈：5′AGCTTTTCCAAAAAATGAAGAAGGCGCGCTACAAT GCTCATCTCTTGAATGA
