孕婦血漿胎兒dna檢測及其在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用論文

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1、孕婦血漿胎兒DNA檢測及其在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用論文王修海姜曉靜紀(jì)向虹【摘要】目的檢測孕婦血漿中游離胎兒DNA的水平，探討應(yīng)用孕婦血漿胎兒DNA進(jìn)行非損傷性產(chǎn)前基因診斷的可行性。方法應(yīng)用血漿DNA抽提法提取63例孕7～40周婦女血漿中胎兒DNA，運(yùn)用PCR擴(kuò)增技術(shù)對SRY基因和4個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）多態(tài)位點(diǎn)（D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1414）進(jìn)行檢測。結(jié)果在33例妊娠男胎的孕婦血漿中，有29例出現(xiàn)SRY基因擴(kuò)增帶，孕早、中、晚期的SRY基因檢出率分別是72.7%(8/11)、90.9%(10/11)、100%(1

2、1/11)。用4個(gè)單一STR多態(tài)位點(diǎn)檢測出胎兒特異等位基因的比例分別為51/63、49/63、16/63、48/63。聯(lián)合應(yīng)用4個(gè)多態(tài)位點(diǎn)可以確定所有孕婦血漿中的胎兒DNA。結(jié)論在不同的妊娠階段都可檢測到孕婦血漿中的胎兒DNA，胎兒DNA檢出率隨孕周的增加增高。孕婦血漿中游離胎兒DNA可以用于無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷?！娟P(guān)鍵詞】胎兒DNA產(chǎn)前診斷聚合酶鏈反應(yīng)串聯(lián)重復(fù)序列［ABSTRACT］ObjectiveTodetecttheregularityofappearanceanddisappearanceoffreefetalDNAinplasmaofpreg

3、nantenandtoexplorethepossibilityofnoninvasiveprenatalgenediagnosisbyusingfetalDNAinmaternalplasma.MethodsTheDNAtemplatesaDNAextractionfrom63gravida(conceived6-40a.SRYgeneandfourshorttandemrepeats(STRs)(D21S11,D21S1411,D21S1412,D21S1414)offetalDNAerasechainreaction(PCR).Results

4、SRYgenealebearingpregnantenplasma.ThedetectingratesofSRYgeneediumtermpregnancy,andlatepregnancy,respectively.ThedetectingratesofafetalspecificbandeansoffoursingleSTRsanalysis,respectively.ThefetalDNAinplasmaenbybiningaternalplasmacanbedetectedindifferentgestationalstages.T

5、hedetectionratesoffetalDNAinmaternalplasmaincreaseaternalplasmacouldberegardedasthegeneresourcefornoninvasiveprenataldiagnosis.［KEYgCl2（25mmol/L）8μL，引物（109F、245R）各300nmol/L，4×dNTP（10mmol/L）200μmol/L，TaqDNA聚合酶1.25U，樣本DNA5μL，去離子水20.75μL。PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性10min；95℃變性15s，60℃退火1min，40個(gè)

6、循環(huán)；72℃延伸10min。每次擴(kuò)增均設(shè)陽性和陰性對照。1.2.4孕婦血漿胎兒DNA多態(tài)位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增25μL反應(yīng)體系內(nèi)含有：10×Buffer2.5μL，4×dNTP（10mol/L）0.3μL，MgCl2（25mmol/L）1.5μL，引物D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1414F、R（10μmol/L）各2.0μL，樣本DNA5μL，TaqDNA聚合酶1.5U，去離子水11.4μL。PCR反應(yīng)程序：94℃10min；94℃48s；60℃48s，72℃1min，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。1.2.5PCR產(chǎn)物的

7、檢測分別取5μLPCR產(chǎn)物在60g/L非變性聚丙烯酰胺凝膠（交聯(lián)度為丙烯酰胺∶甲叉雙丙烯酰胺=29∶1；離子強(qiáng)度為1×TBE）中電泳，200V、25mA室溫下電泳1.5h。凝膠用硝酸銀染色，照相記錄。根據(jù)電泳條帶進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。2結(jié)果2．1不同孕周的孕婦外周血漿SRY基因檢測胎兒出生后證實(shí)63例胎兒中33例為男胎，30例為女胎。在33例男胎妊娠的孕婦外周血漿中檢測到SRY基因，不同妊娠時(shí)期檢出率分別為：孕早期72.7%(8/11)、孕中期90.9%(10/11)、孕晚期100%(11/11)。而在30例女胎妊娠的孕婦外周血漿中未檢測到SRY基因。

8、該方法最早可于孕7周檢測出該基因，分娩后2h內(nèi)檢測不到(圖1)。2．2孕婦外周血胎兒DNA各STR位點(diǎn)的多態(tài)性檢測不同位點(diǎn)