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《不同溫度對(duì)小鼠腎臟急性缺血再灌注損傷的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、不同溫度對(duì)小鼠腎臟急性缺血再灌注損傷的影響作者：張曉麗夏世金嚴(yán)震文肖婧張振興葉志斌【摘要】 目的探討不同溫度對(duì)小鼠腎臟急性缺血再灌注損傷（IRI）的影響及其機(jī)制。方法雄性C57BL/6N小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham組）、輕度低溫IRI組（LTI）、常溫IRI組（NTI）和高溫IRI組（HTI）。采用夾閉雙側(cè)腎蒂35min再灌注48h制成IRI模型。觀察IRI小鼠腎臟組織病理學(xué)改變，檢測(cè)腎功能、腎組織丙二醛（MDA）含量和腎小管上皮細(xì)胞凋亡數(shù)目。結(jié)果與Sham組相比，常溫IRI組小鼠發(fā)生中等程度腎損傷，其Scr升高〔（237.0±41.2）μmol/L〕，腎組織形態(tài)學(xué)改變，腎組織中MDA
2、含量升高〔（1.54±0.37）μmol·L-1·mg-1〕，腎小管上皮細(xì)胞凋亡數(shù)目增加。高溫明顯加重小鼠的IRI損傷（P＜0.05），輕度低溫對(duì)小鼠IRI具有保護(hù)作用。結(jié)論缺血階段體溫的高低明顯影響小鼠腎IRI的程度，輕度低溫可能通過抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和細(xì)胞凋亡對(duì)小鼠發(fā)揮保護(hù)作用；高溫則可能通過促進(jìn)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和細(xì)胞凋亡加重腎IRI?！娟P(guān)鍵詞】高溫；腎臟；缺血再灌注；凋亡 腎臟是一高灌注器官，對(duì)缺血再灌注損傷（ischemia/reperfusioninjury，IRI）異常敏感，故IRI成為急性腎損傷的重要損傷環(huán)節(jié)〔1〕，也是影響腎移植中移植腎早期功能恢復(fù)及長期存活的主要因素〔2〕
3、。鑒于腎IRI病理生理學(xué)機(jī)制復(fù)雜〔3〕，涉及此方面的研究一直走在移植學(xué)研究的前沿。腎IRI動(dòng)物模型為急性缺血性腎損傷的發(fā)生機(jī)制和防治策略研究奠定了基礎(chǔ)。制作腎IRI動(dòng)物模型的方法包括雙側(cè)腎蒂夾閉、雙側(cè)腎動(dòng)脈夾閉、單側(cè)腎切除+對(duì)側(cè)腎動(dòng)脈夾閉等。手術(shù)方法不同、血管夾閉的時(shí)間長短、手術(shù)操作過程中溫度的控制均對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著重要影響，尤其是術(shù)中溫度在此過程中起著不可忽視的作用。本文通過調(diào)控腎缺血過程中小鼠體溫，觀察不同溫度對(duì)小鼠腎IRI的影響，以期為臨床上輔助治療IRI的新途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！ ?材料與方法 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 雄性C57BL/6N小鼠24只，22～26g（SPF級(jí)，中科院上海
4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），隨機(jī)分假手術(shù)（Sham）組、輕度低溫IRI組（LTI）、常溫IRI組（NTI）和高溫IRI組（HTI），每組6只。 1.2模型制作 2%戊巴比妥鈉（50mg/kg）腹腔注射麻醉小鼠，取腹正中切口，鈍性分離腎蒂，無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)腎蒂造成腎缺血，持續(xù)夾閉35min后松開動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流，觀察1min，腎臟由暗紫色逐漸轉(zhuǎn)為鮮紅色，表明再灌注成功，縫合傷口。Sham組只分離腎蒂，關(guān)腹。再灌注48h后，采血并處死小鼠，留取腎組織備用。LTI組在室溫?zé)o熱板狀態(tài)下進(jìn)行手術(shù)；NTI組手術(shù)在熱板上進(jìn)行，手術(shù)過程中每5min測(cè)1次體溫，通過開關(guān)調(diào)控?zé)岚鍦囟龋剐∈篌w溫始終維持在36.0℃
5、～37.0℃之間；HTI組整個(gè)手術(shù)也在熱板上進(jìn)行，溫度不受控制。體溫采用肛溫測(cè)定法?！ ?.3指標(biāo)檢測(cè) 1.3.1腎功能檢測(cè) 眶下靜脈叢采血，分離血清，酶法測(cè)定小鼠血清肌酐（Scr）水平（日立全自動(dòng)生化分析儀）?！ ?.3.2腎組織病理學(xué)檢查 10%中性甲醛固定腎組織，制作石蠟切片，常規(guī)HE染色，顯微鏡下觀察腎臟病理改變。根據(jù)腎小管細(xì)胞扁平、管腔擴(kuò)張、細(xì)胞脫落壞死、腎小管管型堵塞、間質(zhì)水腫，炎癥細(xì)胞浸潤及出血等觀察腎小管間質(zhì)損傷情況?！ ?.3.3腎組織丙二醛（MDA）水平檢測(cè) 取新鮮腎組織100mg制成勻漿，采用硫代巴比妥酸法檢測(cè)MDA含量，按試劑盒（南京建成生物工程研究所）說明
6、書操作?！ ?.3.4細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（TUNEL法），按試劑盒（德國Roche公司）說明書進(jìn)行操作。每一切片選取10個(gè)視野，在200倍光鏡下，盲法觀察染色陽性細(xì)胞數(shù)。 1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用x±s表示。多組間的比較采用單因素方差分析（One. 2結(jié)果 2.1各組小鼠的平均體溫 腎臟缺血35min后，LTI組小鼠平均體溫為（32.8±0.6）℃；NTI組小鼠平均體溫為（36.8±0.4）℃；HTI組小鼠平均體溫為（39.0±0.8）℃?！ ?.2各組小鼠腎功能測(cè)定和腎組織MDA表達(dá) 與Sham組相比，LTI組小鼠Scr升高不明
7、顯；NTI組和HTI組小鼠Scr均明顯升高，且HTI組Scr升高程度較NTI組更加明顯。與Sham組相比，LTI組小鼠腎組織MDA無明顯升高，NTI組和HTI組腎組織MDA水平均較Sham組明顯增加（P＜0.05），以HTI組增加更為顯著（P＜0.05）。見表1。表1各組小鼠Scr水平和腎組織MDA水平(略) 2.3各組小鼠腎臟病理學(xué)改變 HE染色結(jié)果顯示，NTI組和HTI組小鼠腎組織病理學(xué)改變明顯，受損部位集中在外
