蝙蝠葛酚性堿對(duì)k562、bxpc-3增殖的影響論文

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1、蝙蝠葛酚性堿對(duì)K562、BXPC

2、3增殖的影響論文【摘要】目的觀察蝙蝠葛酚性堿（PAMD）在體外的廣譜抗腫瘤作用。方法采用MTT比色法測定不同質(zhì)量濃度的蝙蝠葛酚性堿對(duì)體外處理白血病細(xì)胞株(K562)、人胰腺癌細(xì)胞株(BXPC

3、3）24h的存活率，同時(shí)測定藥物處理不同細(xì)胞株的細(xì)胞增殖抑制率和IC50及IC90。實(shí)驗(yàn)設(shè)立陰性空白對(duì)照組和氟尿嘧啶陽性對(duì)照組。結(jié)果不同質(zhì)量濃度蝙蝠葛酚性堿對(duì)K562、BXPC

4、3細(xì)胞株的細(xì)胞增殖具有抑制作用，抑制作用均與質(zhì)量濃度呈梯度關(guān)系。結(jié)論蝙蝠葛酚性堿對(duì)體外培養(yǎng)人腫瘤細(xì)胞株的增殖有明顯的抑制和殺傷作用，揭示

5、其具有細(xì)胞毒效應(yīng)，蝙蝠葛酚性堿產(chǎn)生抗腫瘤生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)理有待進(jìn)一步研究?！娟P(guān)鍵詞】蝙蝠葛酚性堿人腫瘤細(xì)胞株MTT比色法細(xì)胞毒蝙蝠葛酚性堿(phenolicalkaloidsofmenispermumdauricum,PAMD)是從中藥蝙蝠葛(Menispermumdauricum,DC)根莖中提取的多種脂溶性生物堿的混合物,實(shí)驗(yàn)已證明其主要成分為蝙蝠葛堿(dauricine，Dau)和蝙蝠葛蘇林堿(daurisoline，Ds)，Dau和Ds均為雙芐基異喹啉類生物堿.freelL青霉素和100μg/mL鏈霉素的1640培養(yǎng)液中，37℃

6、,5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，細(xì)胞長至對(duì)數(shù)生長期用于實(shí)驗(yàn)。1.2實(shí)驗(yàn)藥品蝙蝠葛酚性堿由藥學(xué)院王棟教授提供。實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配制成0.625，1.25，2.5，5，10，20，40μg/mL質(zhì)量濃度的混懸液，用0.22μm微孔過濾除菌，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。氟尿嘧啶注射液?.5g/mL），天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)：H12020959。1.3試劑和儀器RPMI1640購自Gibco公司，以10.4g溶于1000ｍＬ三蒸水中，用NaHCO3調(diào)pH值到7.0，過濾除菌，4℃冰箱保存。胎牛血清購自杭州四季青生物工程公司,經(jīng)56℃、30min

7、滅活處理后，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）和二甲亞砜（DMSO）均購自sigma公司。DG5031型酶聯(lián)免疫儀為華東電子管廠產(chǎn)品。1.4MTT法篩選蝙蝠葛酚性堿的抗癌瘤譜4取對(duì)數(shù)生長期的K562、BXPC

8、3細(xì)胞株,配制成1×107/mL單細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板,每孔0.1mL,實(shí)驗(yàn)組分別加入蝙蝠葛酚性堿至終質(zhì)量濃度為40，20，10，5，2.5，1.25，0.625mg/L，每個(gè)藥物質(zhì)量濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，空白對(duì)照組不加藥，置于37℃飽和濕度5％CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)24h，每孔加入20μLMTT(5mg/mL)，

9、再置培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸取上清液，每孔加入100μLDMSO振蕩5min，用酶聯(lián)儀在570nm波長下測定各孔光吸收值(OD值)，記錄結(jié)果。細(xì)胞抑制率計(jì)算公式為：細(xì)胞抑制率=(空白對(duì)照組OD均值-藥物組OD均值)/空白對(duì)照組OD均值×100%。按下列公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞的存活率，判斷蝙蝠葛酚性堿對(duì)腫瘤細(xì)胞的敏感性（腫瘤細(xì)胞的存活率＜30%為高度敏感，30%～50%為中度敏感，＞50%為不敏感）,同時(shí)計(jì)算IC50和IC90，實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)3次。細(xì)胞存活率=實(shí)驗(yàn)組光吸收值/空白對(duì)照組光吸收值×100%1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(±s)

10、表示，采用t檢驗(yàn)比較各組的OD值，采用線性回歸計(jì)算IC50和IC90。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1蝙蝠葛酚性堿對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用不同質(zhì)量濃度的蝙蝠葛酚性堿處理BXPC

11、3、K562細(xì)胞株24h后，對(duì)BXPC

12、3、K562細(xì)胞株的抑制率隨著質(zhì)量濃度的增加而增大；實(shí)驗(yàn)組各劑量組與陽性對(duì)照組比較，質(zhì)量濃度為40，20，10，5，2.5μg/mL時(shí)，對(duì)BXPC

13、3細(xì)胞株的抑制率顯著高于5

14、FU(P＜0.01)，質(zhì)量濃度為40，20，10μg/mL時(shí)，對(duì)K562細(xì)胞株的抑制率顯著高于5

15、FU(P＜0.01)。表明蝙蝠葛酚性堿對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖具有良好的

16、抑制作用。見表1。表1PAMD對(duì)人腫瘤細(xì)胞株的影響注：與空白對(duì)照組比較*P＜0.01，**P＜0.001；與陽性對(duì)照組比較△P＜0.012.2蝙蝠葛酚性堿對(duì)敏感腫瘤細(xì)胞的篩選不同質(zhì)量濃度的蝙蝠葛酚性堿作用于BXPC

17、3、K562細(xì)胞株24h時(shí)均有明顯的細(xì)胞毒效應(yīng)，其中以BXPC

18、3最為敏感，當(dāng)蝙蝠葛酚性堿質(zhì)量濃度為40μg/mL時(shí)，細(xì)胞的存活率僅為8.96%，而同一劑量處理K562細(xì)胞株24h的細(xì)胞存活率為17.91%。各細(xì)胞存活率與蝙蝠葛酚性堿的質(zhì)量濃度呈負(fù)相關(guān)。不同質(zhì)量濃度的蝙蝠葛酚性堿對(duì)各細(xì)胞株存活率的影響見圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明B

19、XPC

20、3、K562對(duì)蝙蝠葛酚性堿的作用都有較強(qiáng)的敏感性。2.3蝙蝠葛酚性堿對(duì)腫瘤細(xì)胞毒的IC50和IC90蝙蝠葛酚性堿對(duì)上述兩種人癌細(xì)胞株均有明顯的體外細(xì)胞毒作用，并且其細(xì)胞效應(yīng)與蝙蝠葛酚性堿的質(zhì)量濃度呈正相關(guān),兩種人