visfatin對(duì)大鼠肝臟膽固醇代謝及srebp2的調(diào)控作用

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1、visfatin對(duì)大鼠肝臟膽固醇代謝及SREBP2的調(diào)控作用【摘要】目的：探討visfatin對(duì)血漿膽固醇代謝和肝膽固醇合成的影響.方法：將空載體轉(zhuǎn)染對(duì)照組（NC組）,大鼠visfatin基因真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染普通飼料組（NT組）和高脂組（HT）大鼠，并測(cè)定轉(zhuǎn)染前后各組大鼠血漿膽固醇及肝臟HMGCoA還原酶和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2（SREBP2）mRNA表達(dá)的變化.結(jié)果：visfatin質(zhì)粒注射3d后，NT和HT組大鼠血漿膽固醇均較注射前明顯下降〔（1.61±0.18）vs（1.25±0.09）mmol/L和（2.37±0.11）vs（1.74±0.12）mmol/L，均P0.05

2、〕；高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)也明顯降低〔（0.83±0.09）vs（0.56±0.09）mmol/L和（1.32±0.09）vs（0.91±0.04）mmol/L,P0.05〕；NT和HT組大鼠SREBP2mRNA表達(dá)均明顯高于NC組〔(0.37±0.06)，（0.36±0.07）vs（0.21±0.04），均P0.05〕,NT組HMGCoA還原酶mRNA水平明顯高于NC，HT組〔（0.89±0.13）vs（0.37±0.07）和（0.55±0.16）,均P＜0.05〕，NC組與HT組無明顯差異.結(jié)論：visfatin可能通過促進(jìn)SREBP2和HMGCoA還原酶表達(dá)來調(diào)節(jié)體

3、內(nèi)膽固醇代謝.【關(guān)鍵詞】內(nèi)脂素膽固醇HMGCoA還原酶固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2　　0引言　　visfatin又稱前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子(PBEF)，是最近發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞因子,也稱為內(nèi)脂素.研究表明，visfatin具有類胰島素作用，能夠促進(jìn)脂肪的合成與聚集〔1-2〕.目前的研究大多集中在visfatin與2型糖尿病、胰島素抵抗、肥胖的關(guān)系，但其與膽固醇代謝的關(guān)系目前并不清楚.固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBP2)與羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶（HMGCoA還原酶）是主要的膽固醇生物合成通路的調(diào)控元件，與膽固醇代謝密切相關(guān).因此，我們通過構(gòu)建大鼠visfatin基因重組真核表達(dá)質(zhì)粒并

4、導(dǎo)入大鼠體內(nèi)，探討visfatin過表達(dá)對(duì)肝SREBP2與HMGCoA還原酶表達(dá)的影響，從而分析其對(duì)膽固醇代謝的調(diào)節(jié)作用.　　1材料和方法　　1.1材料去內(nèi)毒素質(zhì)粒大量提取試劑盒（Omega公司）；Trizol（Invitrogen公司）；反轉(zhuǎn)錄酶MMLV，TaqDNA聚合酶（TaKaRa公司）；羊抗鼠visfatin多克隆抗體（SantaCruz公司）；HRP標(biāo)記的兔抗羊二抗（中杉金橋公司）；化學(xué)發(fā)光試劑盒（康成生物公司）；DYYIII穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、雙垂直板蛋白電泳槽（北京六一儀器廠）；半干轉(zhuǎn)印跡電轉(zhuǎn)系統(tǒng)，BIORADGradientCyclerPCR儀（Biorad

5、）；日立7020型全自動(dòng)生化分析儀；SD雄性大鼠15只（第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）.　　1.2方法　　1.2.1pcDNA3.1visfatin重組真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建本課題組前期構(gòu)建，經(jīng)DNA測(cè)序鑒定，導(dǎo)入基因無突變，構(gòu)建成功.　　1.2.2動(dòng)物分組及處理將大鼠15只隨機(jī)分為正常飲食pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒注射組（NC組,n=5）、正常飲食pcDNA3.1visfatin重組真核表達(dá)質(zhì)粒注射組（NT組,n=5）和高脂飲食pcDNA3.1visfatin重組真核表達(dá)質(zhì)粒注射組（HT組,n=5）.各組大鼠喂養(yǎng)16g/kg.于注射前后72h各取其空腹血，分離血漿，于第2

6、次取血后處死大鼠取肝臟組織.　　1.2.3HMGCoA還原酶和SREBP2表達(dá)測(cè)定用常規(guī)方法提取大鼠肝組織總RNA，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）半定量測(cè)定肝HMGCoA還原酶和SREBP2mRNA，以βactin為內(nèi)參.HMGCoA還原酶上游引物為：5＇CCTGCGTGTCCCTGGTCCTA3＇；下游引物：5＇CTTTGGGTTACTGGGTTTGG3＇.SREBP2上游引物：5＇GGCTCTGGCCGCAATGTA3＇；下游引物：5＇TGACCGAGGAGCGTGAGT3＇.βactin上游引物：5＇CCACTGCCGCATCCTCTTCCTC

7、3＇；下游引物：5＇TCCTGCTTGCTGATCCACATCT3＇.　　1.2.4其他指標(biāo)測(cè)定采用WesternBlot法測(cè)定血漿visfatin水平；血漿總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）在全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定.　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：各項(xiàng)數(shù)據(jù)資料以x±s表示，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較用方差分析，多組間兩兩比較用StudentNeanKeuls檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)處理采用SAS8.0軟件.　　2結(jié)果　　2.1血