不同誘變方法對黃嘌呤氧化酶活性的影響

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1、不同誘變方法對黃嘌呤氧化酶活性的影響#陳素華，許小平**（福州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，福建，福州，350116）510152025303540摘要：以產(chǎn)黃嘌呤氧化酶菌株ArthrobacterX為出發(fā)菌，采用紫外（UV）,硫酸二乙酯（DES）單因子誘變,以及紫外結(jié)合氯化鋰（UV+LiCl）、紫外結(jié)合微波（UV+微波）的復(fù)合誘變方法對ArthrobacterX進(jìn)行誘變。對誘變后的高產(chǎn)菌株UV-4、ULi-10、UW-5作遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)，其中UW-5在連續(xù)傳代6次后其遺傳性狀較UV-4、ULi-10更為穩(wěn)定，其產(chǎn)酶活力比出發(fā)菌株提高了63.46%，XOD比活力也提高了56.66%。是一株比較

2、理想的黃嘌呤氧化酶高產(chǎn)菌株。關(guān)鍵詞：黃嘌呤氧化酶；復(fù)合誘變；篩選中圖分類號：TQ464.8EffectontheActivityofXanthineOxidasebyDifferentMutationMethodsCHENSuhua,XUXiaoping(CollegeofChemistryandChemicalEngineeing,FuzhouUniversity,Fujian350116，China)Abstract:Variousmutatingmethodsincludingultraviolet(UV),diethylsulfate(DES)andcomplexmutagen

3、esis(combinationofLiClandultravioletrays,ultravioletraysandmicrowaveirradiationwereemployedtodealwithaxanthineoxidaseproducingstrainArthrobacterX.Thenthehigh-yieldingmutantstrainsUV-4,ULi-10,UW-5weretestedforgeneticstability.AftersuccessivelyculturedsixtimesfoundthathereditycharacterofUW-5wassta

4、blerthanUV-4,ULi-10.Itsenzymeactivityincreasedby63.46%andXODspecificactivityincreasedby56.66%overtheoriginalstrain.Keywords:Xanthineoxidase;complexmutagenesis;screening0引言黃嘌呤氧化酶（xanthineoxidase）簡稱XOD(EC.122)是生物體內(nèi)核酸代謝過程中重要的酶類[1]，黃嘌呤氧化酶在生理環(huán)境條件下能夠催化核苷的代謝產(chǎn)物次黃嘌呤先氧化形成黃嘌呤，再進(jìn)一步氧化生成尿酸和過氧化氫，其氧化產(chǎn)物尿酸和氧自由基具有

5、重要的生理及病理功能。因此，該酶正在被開發(fā)成為一種具有高價值的商業(yè)用酶，應(yīng)用于檢測血清無機(jī)磷[2]、血清超氧化物歧化酶活力、細(xì)胞損傷后胞外次黃嘌呤和黃嘌呤水平以及次黃嘌呤核苷（肌[3]解亞硝基鹽、三硝基苯甲硝胺等土壤和地下水污染也有重要作用。因此開發(fā)和研究XOD具有重要理論意義和廣闊的應(yīng)用前景。但野生型XOD菌株代謝較低，不能滿足大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的需求。因而選育和改良XOD高產(chǎn)菌株就顯得十分重要，目前常用的選育方法為誘變育種。本試驗(yàn)采用各種誘變方法對一株黃嘌呤氧化酶產(chǎn)生菌ArthrobacterX進(jìn)行了處理，同時探討了誘變因素對其產(chǎn)酶能力的影響，以期提高其產(chǎn)黃嘌呤氧化酶的能力，為高產(chǎn)菌株

6、的選育制定依據(jù)，為黃嘌呤氧化酶的工業(yè)化生產(chǎn)提供一條新的綠色途徑?；痦?xiàng)目：高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金（No.20103514110002）作者簡介：陳素華（1984-）女，碩士研究生，研究方向:生物化工通信聯(lián)系人：許小平（1962-）男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向:生物化工.E-mail:xu@fzu.edu.cn-1-苷）、鳥嘌呤、鳥苷、鳥嘌呤酶和核苷磷酸化酶的活性等。另據(jù)Jalal報道，該酶對于降1材料與方法451.11.2菌株ArthrobacterX菌株，本實(shí)驗(yàn)室保藏。培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基：NaCl5.0g/L，牛肉膏3.0g/L，蛋白胨10.0g/L，pH值7.5

7、。初篩培養(yǎng)基：NaCl5.0g/L，牛肉膏3.0g/L，蛋白胨10.0g/L，黃嘌呤0.76g/L，瓊脂15g/L，pH值7.5。基本產(chǎn)酶培養(yǎng)基：K2HPO4·3H2O4.15g/L，KH2PO40.26g/L，NaCl1.0g/L，CaCl24.5mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.5mg/L，MgSO4·7H2O0.2mg/L，(NH4)2SO43.0g/L，黃嘌呤0.66g/L，50乳糖10.0g/L，pH值8.0。發(fā)酵培養(yǎng)：將培養(yǎng)至對數(shù)