衰老對大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團5羥色胺轉(zhuǎn)運體表達的影響

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1、衰老對大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團5羥色胺轉(zhuǎn)運體表達的影響作者：樊平康云霄石葛明王磊張國梁李錦【摘要】　　目的觀察衰老對大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團5羥色胺轉(zhuǎn)運體表達的影響。方法選取雄性3月齡和24月齡L）、前角運動核（VH）、背外側(cè)核（DLN）、球海綿體肌脊髓核（SNB）和骶副交感核（SPN）SERT免疫反應(yīng)強度的灰度值。結(jié)果3月齡及24月齡大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團均存在SERT免疫陽性纖維及膨體，兩組所觀察核團未見SERT免疫反應(yīng)分布方式的改變，但表現(xiàn)SERT免疫反應(yīng)強度的不同，24月齡組SERT免疫陽性纖維及膨體少于3月齡組大鼠。24月齡組大鼠在脊

2、髓DGC、IML、VH、DLN及SNB的SERT免疫反應(yīng)強度灰度值明顯高于3月齡組(P＜0.05)。結(jié)論老年大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團SERT免疫反應(yīng)強度的減弱提示5羥色胺能神經(jīng)纖維對這些核團支配隨衰老而減少?！娟P(guān)鍵詞】5羥色胺轉(zhuǎn)運體；衰老；排尿；大鼠　　研究顯示，老年人多有排尿障礙，隨著衰老而出現(xiàn)尿頻、尿不盡等癥狀〔1〕，老年大鼠也有類似的排尿障礙〔2〕，這可能與排尿的神經(jīng)調(diào)節(jié)或排尿器官的衰老性改變有關(guān)。脊髓參與排尿控制的傳出核團位于腰骶膨大處，這些排尿相關(guān)核團接受許多下行纖維的支配，其中5羥色胺(5HT)能神經(jīng)纖維的信息傳遞在排尿控制中起著

3、十分重要的作用〔3～6〕。腰骶髓排尿相關(guān)核團5HT能神經(jīng)體系是否隨衰老出現(xiàn)表達降低尚不清楚。本研究利用免疫組織化學方法分析老年大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團5HT神經(jīng)體系特異性標記物5羥色胺轉(zhuǎn)運體（serotonintransporter，SERT）免疫陽性纖維和膨體分布及反應(yīng)強度的變化，探討老年排尿障礙的神經(jīng)作用機制?！　?材料與方法　　1.1動物　　選取3月齡和24月齡健康雄性1850恒冷箱冷凍切片機（德國LEica公司產(chǎn)品），HPIAS1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)（武漢長海科技有限責任公司產(chǎn)品）；多克隆兔抗SERT抗體購自美國Im

4、munoStar公司，山羊抗兔生物素化二抗及鏈霉親和素過氧化物酶復合物購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。　　1.3免疫組織化學及圖像分析　　所有大鼠于深麻醉下以4%多聚甲醛常規(guī)經(jīng)心灌注固定，取第1、第2腰髓節(jié)段（L1～L2）和第6腰髓到第1骶髓（L6～S1）節(jié)段后固定4h，加入30%蔗糖溶液4℃過夜。將所取部位橫斷面冷凍切片（40μm）、間斷集片，經(jīng)PBS洗片后行SABC免疫組織化學顯色。步驟：正常血清室溫孵育切片30min、1∶2000多克隆SERT抗體4℃孵育48h、1∶500生物素化二抗室溫孵育2h、1∶500鏈霉親和素過氧化物酶復合

5、物室溫孵育1h、DAB顯色5min；常規(guī)梯度脫水、透明、封片。陰性對照實驗以PBS替代一抗。切片以HPIAS1000彩色病理圖文分析系統(tǒng)測量各月齡組大鼠灰質(zhì)后連合（dorsalgreymissure，DGC）、中間外側(cè)核（intermediolateralnucleus，IML）、前角運動核（VH）、背外側(cè)核（dorsallateralnucleus，DLN）、球海綿體肌脊髓核（spinalnucleusofthebulbocavernosus，SNB）和骶副交感核（sacralparasympatheticnucleus，SPN）SERT免

6、疫反應(yīng)強度的灰度值?！　?.4統(tǒng)計學方法　　數(shù)據(jù)以x±s表示，經(jīng)方差齊性檢驗后行成組設(shè)計的t檢驗?！　?結(jié)果　　2.1各組大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團SERT免疫組化　　脊髓腰骶部排尿相關(guān)核團含有較豐富的SERT免疫陽性纖維及膨體，點狀的免疫反應(yīng)膨體分布于核團神經(jīng)元胞體周圍。兩組大鼠核團SERT免疫陽性纖維和膨體的分布方式未見明顯區(qū)別，但免疫反應(yīng)強度在兩組存在顯著差異，24月齡組SERT免疫陽性纖維及膨體在DGC、IML、VH、DLN和SNB少于3月齡組。見圖1?！　?.2衰老對大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團SERT免疫反應(yīng)強度的影響　　與3月齡組比較，24

7、月齡組所觀察的部分核團SERT免疫反應(yīng)陽性纖維和膨體的灰度值顯著增加；在DGC升高了13.3%；IML、VH、DLN和SNB分別升高了10.7%、8.3%、12.4%和5%。兩組SPN處SERT免疫反應(yīng)陽性纖維和膨體的灰度值無顯著差異，僅存在升高的趨勢。見表1。表1衰老對大鼠腰骶髓排尿相關(guān)核團SERT免疫反應(yīng)強度的影響(略)　　3討論SERT是位于5HT能神經(jīng)末梢的一種膜蛋白，從突觸間隙中重攝取5HT入突觸前末梢，從而調(diào)節(jié)5HT的作用強度和時間，其表達變化直接影響5HT能神經(jīng)元參與的神經(jīng)活動。研究表明，SERT比5HT更能準確反映腦內(nèi)

8、5HT能神經(jīng)體系的變化〔7〕。本研究顯示，DGC、IML、VH、DLN和SNB的SERT免疫反應(yīng)陽性纖維和膨體顯著減少，SPN處雖無顯著差異，但也存