血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管發(fā)生素

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1、血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管發(fā)生素作者:柳明洙,張學武,高圭永,金善姬,張琚【關(guān)鍵詞】斑馬魚;,,血管發(fā)生素  摘要:目的探討血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管發(fā)生素1及其受體在斑馬魚早期胚胎發(fā)育過程中的表達,為構(gòu)建藥物篩選的在體模型提供依據(jù)。方法采用多聚酶鏈式反應(yīng),擴增了長約280bp的斑馬魚血管發(fā)生素1cDNA部分序列,作為探針,以原位雜交法測定了血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管發(fā)生素1及其相應(yīng)受體flk1和Tie2的表達。結(jié)果從受精卵胚胎發(fā)育第12小時可見血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管發(fā)生素1及其相應(yīng)受體flk1和Tie2的表達;在受精卵胚胎發(fā)育的第16小時,血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管發(fā)生素

2、1主要在頭部和尾部胚芽表達;第24小時在眼球、視窩、中腦、后腦的腹前側(cè)和肌節(jié)中表達,Tie2和Flk1主要在肌間背部動脈血管、軀干新生血管芽和軸向靜脈中表達。結(jié)論血管內(nèi)皮細胞生長因子和血管發(fā)生素-1及其受體在斑馬魚胚胎發(fā)育早期的血管發(fā)生過程中可能相互作用,并協(xié)調(diào)血管發(fā)生過程。斑馬魚是研究胚胎發(fā)育早期微血管發(fā)生和血管發(fā)生的極佳動物模型,可用于促血管發(fā)生或抑制血管發(fā)生藥物篩選?! £P(guān)鍵詞:斑馬魚;血管發(fā)生素1;血管內(nèi)皮生長因子;受體  ExpressionsofAngiopoietin1andItsReceptorsDuringEarlyDevelopmentinZebrafish

3、  Abstract:ObjectiveToinvestigatetheexpressionofvascularendothelialgrobryodevelopmentofzebrafish.MethodsUsinghomology-basedpolymerasechainreaction,a280bpofpartialcDNAofzebrafish(zfAng1)inedduringupto24hembryonicdevelopmentbyountinsituhybridization.ResultsThereainlyinheadandtailbud.At24h,Ang1

4、ainlyinthelens,opticcup,mesencephalon,ventralpartofhindbrain,andmyotomesinthesomites,ainlyexpressedinintersomiticvesselsincludingdorsalaortaandaxialvEIns,andsproutingvesselsfromthedorsalaortainthetrunk.VEGFainlyinthelens,opticcup,mesencephalonandmyotomesinthesomites,ainlyexpressedinintersomi

5、ticvesselsincludingdorsalaortaandaxialveins,andsproutingvesselsfromthedorsalaortainthetrunk.ConclusionAng1,VEGF,Tie2andFlk1,mayactcooperativelyandinteractivelyforvasculardevelopmentinzebrafishduringearlydevelopment.Presentresultsalsosuggestedthatzebrafishasaqualitymodelforstudyonvasculogenes

6、isandangiogenesisduringembryonicdevelopmentandscreeningforangiogenicenhancerorinhibitors.  Keya公司?! ?.2斑馬魚Ang1(zebrafishAng1,zfAng1)cDNA部分序列的分離從受精卵發(fā)育24h的胚胎lZAPcDNA文庫(Stratagene,USA)中以PCR和特定引物擴增出一段斑馬魚zfAng1cDNA部分序列,引物根據(jù)包括人、小鼠和牛在內(nèi)的Ang1蛋白的羧基端結(jié)構(gòu)域纖維蛋白樣結(jié)構(gòu)域(fibrinogenlikedomain)的氨基酸序列設(shè)計。所用的引物:5'TAC

7、AA(A/G)AA(A/G)GG(A/G)TT(C/T)GG(A/G)AATCC(AGCT)3',與人的Ang1蛋白的第344到第352位氨基酸序列YKKGFGNP相對應(yīng);5'(TG)CA(C/T)GC(A/G)TC(A/G)AACCACCA(C/T)CC(A/G)CC3',與人的Ang1蛋白的第445到第452位氨基酸序列GGicrotome(Zeiss)低溫切片機制成1mm厚切片?! ?結(jié)果  2.1zfAng1的cDNA和氨基酸序列用同源PCR法擴增得到了約280bp的zfAng1cD

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