兔下頜角截骨后咬肌肌球蛋白重鏈mrna表達(dá)的變化

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1、兔下頜角截骨后咬肌肌球蛋白重鏈mRNA表達(dá)的變化［摘要］目的:通過對兔下頜角弧形截骨后咬肌肌球蛋白重鏈（MHC）mRNA測定，研究咬肌在骨架縮短后的適應(yīng)性變化規(guī)律。方法:3月齡雌性新西蘭大白兔25只，行左側(cè)下頜角弧形截骨，右側(cè)不手術(shù)作自身對照。2、4、8、12和24周分別處死5只動物，提取咬肌MHCⅠ、MHCⅡ型和內(nèi)參GAPDH的mRNA進(jìn)行RT.PCR。結(jié)果:手術(shù)側(cè)較對側(cè)MHCⅠ型的mRNA轉(zhuǎn)錄降低，12周后正常。MHCⅡmRNA2周時先降低，4周后恢復(fù)正常。2、4、8周MHCⅡ.MHCⅠ手術(shù)側(cè)較對側(cè)增加。結(jié)論:下頜骨架縮短后咬肌發(fā)生適

2、應(yīng)性的改建，咬肌組分的這種變化有利于建立口頜系統(tǒng)新的平衡和咀嚼功能的恢復(fù)。　?。坳P(guān)鍵詞］下頜角截骨;咬肌;肌球蛋白重鏈;兔　　面部形態(tài)是軟組織及骨組織相互作用和影響的最終產(chǎn)物，這種互動作用在面部輪廓形態(tài)中具有重要意義。最富有變化且體現(xiàn)個性特征的是面中、下1.3，下頜骨和咬肌對于面下部形態(tài)起著重要作用。按照東方人的審美觀，以橢圓形或“瓜子臉”為美，因此，下頜角截骨治療方腮畸形的措施是目前顱頜面外科常行的美容手術(shù)之一。我們用兔模擬臨床下頜角截骨，通過對咬肌肌球蛋白重鏈的兩個亞型，即肌球蛋白重鏈（myo-sinheavychain，MHC）Ⅰ、

3、Ⅱ型mRNA表達(dá)量的測定，研究咬肌的改建能力及功能的恢復(fù)特點，為臨床下頜骨架改變手術(shù)提供一定的理論依據(jù)?！　?材料和方法　　1.1材料　　雌性3月齡新西蘭大白兔25只（東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供），體重220～270g。左側(cè)下頜角截骨，為手術(shù)側(cè)，右側(cè)為非手術(shù)側(cè)，設(shè)為對照。以0.6%戊巴比妥鈉靜脈注射麻醉。于左側(cè)下頜角處作一長2～3cm切口，沿骨面分離咬肌和翼內(nèi)肌附著部至下頜角前后切跡連線，以前后切跡溝連線作垂線與下頜角形成交點，該交點沿垂線上0.5cm取一定點，以前后切跡點和定點作一條弧線，用磨鉆沿弧線打孔定位后截骨。肌肉放置原位，縫

4、合切口。術(shù)后3d用抗生素預(yù)防感染。分別于術(shù)后2、4、8、12和24周處死5只動物，于定點處取部分咬肌，大小0.8cm×0.5cm×0.5cm，迅速放入-70℃冷凍保存。　　1.2RNA的提取與RT.PCR　　（1）總RNA的提取:采用Trizol一步法提取組織的總mRNA。（2）總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA:根據(jù)RevertaidTMFirstStrandcDNASynthesisKit說明書，以總mRNA為模板合成相應(yīng)的互補cDNA。反應(yīng)體系為20μl，反應(yīng)條件為70℃變性5min，42℃反轉(zhuǎn)錄1h，最后70℃5min滅活反轉(zhuǎn)錄酶。（3）P

5、CR:在同一管中擴增MHCⅠ、MHCⅡ及GAPDHmRNA的cDNA產(chǎn)物，反應(yīng)體系為50μl，反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性5min，95℃變性40s，59℃退火1min，72℃延伸2min，共循環(huán)29次，最后72℃再延伸10min。（4）本實驗所用的PCR引物為MHCⅠ上游5′.GGATCCCTGGAGCAGGAGAA.3′、下游5′.CTTG-CATTGAGGGCATTCAG.3′，大小173bp;MHCⅡ上游5′.CCCTAAAGCGGGAGAATAAG.3′、下游5′.GCTCTG-CATCGACTCTACCAC.3′，大小307bp;G

6、APDH上游5′.GATCCATTCATTGACCTCCACTA.3′、下游5′.CACCACCT-TCTTGATGTCGTC.3′，大小703bp?！　?.3MHCmRNA轉(zhuǎn)錄量分析　　各組分別取8μlPCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。對經(jīng)EB染色后的目的條帶和內(nèi)參條帶進(jìn)行攝像，應(yīng)用Imagemaster圖像分析儀進(jìn)行掃描，TotalLab圖像分析軟件分析圖譜，計算目的MHC的相對含量。目的mRNA的相對含量:某mRNA水平相對值=目的條帶光密度值.內(nèi)參GAPDH條帶光密度值?！　?結(jié)果　　2.1PCR產(chǎn)物的凝膠電泳見圖1。PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠

7、電泳鑒定，擴增片斷特圖1不同時間MHCⅠ、MHCⅡ和GAPDH的電泳條帶　　2.2統(tǒng)計結(jié)果　　見表1。術(shù)后2周左側(cè)咬肌MHCⅠ和MHCⅡ的mRNA表達(dá)量較右側(cè)顯著下降，4周后MHCⅡ的mRNA左、右側(cè)咬肌無顯著性差異。12周后MHCⅠ的mRNA表達(dá)量雙側(cè)無顯著性差異，MHCⅡ.MHCⅠ之值2、4、8周左側(cè)高于右側(cè)，雙側(cè)有顯著性差異?！　?.3檢測指標(biāo)與統(tǒng)計學(xué)處理　　根據(jù)原始數(shù)據(jù)分別計算各組MHCⅠ、MHCⅡ、MHCⅡ.MHCⅠmRNA含量的相對值，其中MHCⅠ與MHCⅡ分別代表各自的mRNA水平，MHCⅠ.MHCⅡ之值代表了兩種亞型之間的

8、比例關(guān)系?！　∪繑?shù)據(jù)均采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS11.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，手術(shù)側(cè)和非手術(shù)側(cè)的比較采用t檢驗。表1非截骨側(cè)和截骨側(cè)咬肌MHCⅠ、MHCⅡ、MHCⅡ.MHCⅠmRNA含量的相對值（略）