乏氧對(duì)人舌鱗癌tca8113細(xì)胞hif1α表達(dá)影響的研究論文

《乏氧對(duì)人舌鱗癌tca8113細(xì)胞hif1α表達(dá)影響的研究論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、乏氧對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞HIF1α表達(dá)影響的研究論文王霞王培源孫善珍吳淑華曲迅張祥盛【摘要】目的初步研究乏氧對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞HIF1α表達(dá)水平的影響。方法將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Tca8113細(xì)胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合氣體的乏氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，分別在乏氧培養(yǎng)1/2、1、3、6、12和24h時(shí)取出。每個(gè)時(shí)間段均設(shè)常氧培養(yǎng)對(duì)照組（5%CO2、95%O2）。采用RTPCR技術(shù)檢測(cè)不同培養(yǎng)條件下細(xì)胞HIF1αmRNA的表達(dá)情況。結(jié)果HIF1α的表達(dá)在乏氧12h明顯升高并達(dá)最高峰，24

2、h時(shí)又下降至常氧水平。每個(gè)時(shí)間段乏氧組HIF1α的表達(dá)均高于其相應(yīng)的常氧對(duì)照組。結(jié)論乏氧影響了人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞HIF1α基因的表達(dá)水平，腫瘤細(xì)胞通過上調(diào)HIF1α基因的表達(dá)適應(yīng)腫瘤乏氧的微環(huán)境，有利于腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。【關(guān)鍵詞】乏氧；缺氧誘導(dǎo)因子1α；Tca8113【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofhypoxiaonHIF1αexpressionintonguesquamouscancercelllineTca8113cells.Method

3、sTca8113cellsinlogarithmicgroRNARNAincreasedsignificantlyandreachedthepeackafter12hofhypoxia,andthendecreasedtothelevelofnormoxicconditionsat24h.TheexpressionofHIF1αmRNAinhypoxiaoxiccontrolgroups.ConclusionHypoxiaupregulatestheexpressionofHIF1αmRNA,akescan

4、cercellstoadopthypoxiainsolidtumor,andtopromotetumordevelopment.【KeyRNA水平的表達(dá)變化，觀測(cè)乏氧對(duì)該基因的影響，為腫瘤的治療尋找新的治療靶點(diǎn)。1材料與方法1.1主要試劑、儀器與細(xì)胞RPMI1640(GIBCO)；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；Tca8113人舌鱗癌細(xì)胞系（中科院上海細(xì)胞庫(kù)）；乏氧培養(yǎng)箱(HERAcell150,GERMAN)；RNA提取試劑盒（Trizol，上海生工）；RTPCR試劑盒（Takara產(chǎn)品）；DL

5、2000DNAMarker（Takara產(chǎn)品）；PCR儀(Eppendorf，德國(guó))。1.2細(xì)胞培養(yǎng)人舌鱗癌細(xì)胞株Tca8113單層貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)液由RPMI1640、10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml的鏈霉素構(gòu)成。置于5%CO2的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，更換培養(yǎng)液為無血清培養(yǎng)基，而后進(jìn)行乏氧培養(yǎng)，即把細(xì)胞置于1%O2、5%CO2、94%N2混合氣體的乏氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。分別在乏氧培養(yǎng)1/2、1、3、6、12和24h時(shí)取出。每個(gè)時(shí)間段均設(shè)常氧培養(yǎng)對(duì)照組（5%CO2、95%O

6、2）。1.3細(xì)胞總RNA的抽提（Trizol試劑盒）將在不同含氧狀態(tài)下培養(yǎng)的細(xì)胞，去除培養(yǎng)液后加PBS溫柔洗滌3次，加Trizol500μl，充分混勻，-20℃過夜。加入200μl氯仿，劇烈震蕩混勻30s；12000r/min室溫離心15min；小心轉(zhuǎn)移上清至RNasefree1.5ml離心管里，加入等體積的異丙醇，室溫離心；棄上清，加入無水乙醇洗滌兩次，室溫下使酒精完全揮發(fā)；沉淀用30～100μlDEPCH2O溶解。測(cè)定樣品在260nm和280nm的吸收值進(jìn)行RNA的純度和濃度分析。1.4RTPCR檢測(cè)按

7、照Takara逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明，以總RNA為模板，以O(shè)ligo（dT）為引物合成cDNA第一條鏈，反應(yīng)溫度為45℃25min，99℃5min，5℃5min。HIF1α的引物序列：sense：5’GTCTCGAGATGCAGCCAGAT3’,antisense：5’TCACCAGCATCCAGAAGTTTC3’，片段長(zhǎng)度為169bp（山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供）。在同一試管中加入5×PCRBuffer10μl，TakaraExTaqTMHS0.25μl，Primer各0.5μl，滅菌三蒸水加至50μl，PCR

8、擴(kuò)增條件為94℃20s，58℃20s，72℃1min，共34個(gè)循環(huán)，最后延伸72℃7min。實(shí)驗(yàn)中以雙蒸水代替cDNA作陰性對(duì)照。1.51.2%瓊脂糖凝膠電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物取RTPCR產(chǎn)物6μl和TakaraDL2000DNAMarker5μl電泳，紫外照相。捷達(dá)專業(yè)數(shù)碼凝膠成像與分析系統(tǒng)3.3測(cè)定不同培養(yǎng)條件下HIF1α條帶的光密度均值（OD）。2結(jié)果在不同培養(yǎng)條件下