反相高效液相色譜法測定苦丁茶含片中槲皮素和山柰素的含量論文

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1、反相高效液相色譜法測定苦丁茶含片中槲皮素和山柰素的含量論文【摘要】目的建立反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定苦丁茶含片中槲皮素和山柰素的含量。方法以NovaPakC18(3.9mm×300mm，4.0μm)為色譜柱；甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）為流動相；檢測波長360nm；流速0.7ml·min-1；柱溫40℃。結果槲皮素的進樣量在0.01299～0.6496μg范圍內，山柰素的進樣量在0.01334～0.6672μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。平均加樣回收率分別為97.03%和97.34%，RSD分別為1.

2、16%(n=6)及1.42%(n=6)。結論該方法簡便、快速、準確，可作為苦丁茶含片中槲皮素和山柰素的含量測定方法。【關鍵詞】苦丁茶含片；高效液相色譜法；槲皮素和山柰素Abstract：ObjectiveToestablishanRP-HPLCmethodfordeterminationofthecontentofquertetinandkaempferolinKudindchatablets.MethodsTheNova－PakC18column(3.9mm×300mm,.freel)obilephaseethanol-0.4

3、%H3PO4（50∶50），thedetection，theflol·min-1，thetemperaturepferolethodissimple.freelinationofthecontentofquertetinandkaempferolinKudindchatablets.Keypferol冬青屬苦丁茶是我國南部及西南部民間傳統(tǒng)的天然藥用植物，具有清熱解毒、生津、提神、益智、抗衰老、調血壓、降脂等作用［1，2］。有文獻報道［3，4］苦丁茶中含有豐富的黃酮類化合物，熊果酸及多種皂苷，其中有些黃酮苷元（槲皮素、山柰素、異鼠

4、李素等）含量與銀杏葉相當［4］。為了對廣西苦丁茶進行開發(fā)利用，同時為了方便和滿足臨床的需求，我們擬研制開發(fā)新制劑——苦丁茶含片。本文采用高效液相色譜法測定了苦丁茶含片中槲皮素和山柰素的含量，以期為苦丁茶含片質量控制提供參考。1儀器與試藥Aters液相色譜儀（illennium32數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）。槲皮素和山柰素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為：0081－9304，0861－200002），甲醇（色譜純）；磷酸(分析純)，水為重蒸水?？喽〔韬ū驹鹤灾疲?。2方法及結果2.1色譜條件色譜柱為Nova－PakC18柱(3.9

5、mm×300mm，4.0μm)；流動相為甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）；檢測波長360nm；流速0.7ml·min-1；柱溫40℃。圖1高效液相色譜圖（略）2.2溶液的制備2.2.1對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品8.12mg和山柰素對照品8.34mg，分別置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.1624mg·ml-1的槲皮素對照液和濃度為0.1668mg·ml-1的山柰素對照液。2.2.2供試品溶液的制備取苦丁茶含片20片，精密稱定（平均片重為0.5108g），研細，精密稱取細粉約2.0g置具

6、塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精取續(xù)濾液10ml，置100ml錐形瓶中，加甲醇10ml，25%鹽酸溶液5ml，置水浴中加熱回流0.5h，取出后迅速冷至室溫，轉移至50ml量瓶中并用甲醇定容至刻度，搖勻，經0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.2.3陰性溶液的制備按處方制備不含苦丁茶浸膏的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。2.3空白對照實驗分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性空白對照液，按上述色譜條件

7、測定。結果見圖1，表明空白無干擾。2.4線性關系考察分別精密吸取“2.2.1”項下配制的槲皮素對照液和山柰素對照液各0.1，0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，5.0ml置同一25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，按上述色譜條件，進樣20μl，測定槲皮素及山柰素的峰面積。以進樣量(X)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，結果回歸方程為：槲皮素Y＝5392003X-67439(r＝0.9999)，山柰素Y＝5304855X＋478(r＝0.9999)。結果表明，槲皮素的進樣量在0.01299～0.6496μg范圍內

8、，山柰素的進樣量在0.01334～0.6672μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。2.5精密度實驗精密吸取上述混合對照品溶液(槲皮素12.992μg·ml-1；山柰素13.344μg·ml-1)10μl，連續(xù)進樣5次，結果槲皮素峰面積的RSD＝1.87%，山柰素