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《正常成年大鼠腦內(nèi)環(huán)氧合酶》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、正常成年大鼠腦內(nèi)環(huán)氧合酶作者：汪丙昂，趙振偉,孟新文【關(guān)鍵詞】環(huán)氧合酶 Expressionofcyclooxygenase2inthebrainsofnormaladultrats 【Abstract】AIM:Toobservetheexpressionofcyclooxygenase2(COX2)inthebrainsofnormaladultrats.METHODS:TheimmunohistochemicalABCmethodandtheCOX2polyclonalantibodyaladultrat
2、s.RESULTS:Therepus,thedentategyrus,thesupraopticnucleus,theamygdaloidnucleus,cerebellumandbrainstem,andsoon.TheCOX2immunopositivecellsainlyneurons,andafemunocytochemistry 【摘要】目的：觀察正常大鼠腦內(nèi)環(huán)氧合酶2（COX2）的表達.方法：用自行制備的COX2多抗采用免疫組織化學(xué)ABC法觀察了COX2蛋白在正常成年大鼠腦內(nèi)的表達.結(jié)果：在正常成年
3、大鼠腦內(nèi)COX2蛋白主要表達于皮層、海馬、齒狀回、視上核、杏仁核、小腦和腦干等部位，陽性細胞主要為神經(jīng)元，神經(jīng)膠質(zhì)細胞染色很少.結(jié)論：COX2蛋白在腦內(nèi)廣泛分布. 【關(guān)鍵詞】環(huán)氧合酶2；大鼠；免疫細胞化學(xué) 0引言 環(huán)氧合酶（COX）是前列腺素生成的限速酶，有兩個異構(gòu)體：環(huán)氧合酶1（COX1）和環(huán)氧合酶2（COX2）.COX2具有重要的生物學(xué)作用，由其催化生成的前列腺素是機體內(nèi)重要的第二信使；COX2與神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)、突觸可塑性［1］以及痛覺敏感性［2］有關(guān)，并被作為抗炎治療的靶標.但目前關(guān)于COX2蛋白在正常
4、大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達分布的報道還很少，而且COX2在神經(jīng)系統(tǒng)的許多重要功能的細節(jié)還有待進一步闡明.我們用COX2多抗觀察正常大鼠腦內(nèi)COX2蛋白的表達如下. 1材料和方法 1.1材料雄性SD大鼠6只，體質(zhì)量180~250g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供.聚苯乙烯ELISA板購自于美國Nunc公司.COX2的多克隆抗體由我們制備［3］. 1.2方法大鼠用10g/L戊巴比妥鈉（60mg/kg）麻醉后開胸，經(jīng)心灌流，先用100mL生理鹽水快速灌注沖洗血液，然后用預(yù)冷的40g/L多聚甲醛固定液400mL灌流.待固
5、定液滴注完畢，取出全腦，用40g/L多聚甲醛后固定2h，再放入200g/L蔗糖溶液，4℃過夜.組織塊完全沉底后用冰凍切片機連續(xù)冠狀切片，每5張取1張，腦片厚50μm.先將所有切片經(jīng)0.01mol/LPBS漂洗5min×3次后，浸入800mL/L甲醇和3mL/L過氧化氫封閉30min，0.01mol/LPBS漂洗10min×3次，再用10g/L牛血清白蛋白和30mL/L羊血清和3mL/LTritonX100封閉1h，用ABC方法進行免疫組化染色.免疫兔血清（1∶1000）作為一抗，孵育切片，室溫下36h，0.01m
6、ol/LPBS漂洗10min×3次；生物素化的羊抗兔IgG（1∶500，Sigma公司）孵育切片，室溫下4h，0.01mol/LPBS漂洗10min×3次；生物素卵白素辣根過氧化物酶復(fù)合物（ABC，1∶500，Vector公司）孵育切片，室溫2h，0.01mol/LPBS漂洗10min×3次；硫酸鎳胺加強DAB藍色反應(yīng)呈色.當(dāng)陽性產(chǎn)物呈深藍色而背底幾乎無色時終止反應(yīng).經(jīng)脫水、透明和封片后，OlympusBH2顯微鏡鏡檢.部分切片用做免疫組化方法對照實驗，一抗用牛血清白蛋白稀釋液替代，二抗、ABC復(fù)合物同其他免疫組
7、化反應(yīng)切片，結(jié)果未見陽性.2結(jié)果 在正常成年大鼠腦內(nèi)COX2的分布比較廣泛（圖1）.陽性細胞主要為神經(jīng)元，沒有見到明顯的膠質(zhì)細胞呈現(xiàn)COX2免疫陽性染色.但是還有一些不明類型的細胞也表達COX2. A:皮層;B:海馬;C:齒狀回;D:小腦;E:杏仁核;F:下丘腦視上核. 圖1COX2在正常成年大鼠腦內(nèi)的表達ABC×140（略） 在大腦皮質(zhì)，COX2陽性細胞為神經(jīng)元樣形態(tài)，皮質(zhì)6層均有分布，陽性細胞胞體呈錐形、類圓形或不規(guī)則形，突起較長.其中外顆粒層和內(nèi)、外錐體層的細胞染色最強，突起明顯.而其余各層的陽性細
8、胞染色很淡，突起也不明顯.海馬CA1CA4區(qū)許多細胞為COX2免疫陽性，陽性細胞染色中等，形態(tài)不規(guī)則；齒狀回也有許多顆粒細胞呈現(xiàn)明顯的COX2陽性染色.正常大鼠的視上核也有許多細胞呈現(xiàn)COX2陽性染色，染色中等，細胞形態(tài)多數(shù)為神經(jīng)元樣.丘腦背側(cè)核群、下丘腦視前區(qū)和室旁核也有散在分布的染色很淡的陽性細胞，杏仁核也有少量細胞呈現(xiàn)COX2陽性染色.中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)和藍斑均有C
