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《正常成年大鼠腦內(nèi)環(huán)氧合酶》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、正常成年大鼠腦內(nèi)環(huán)氧合酶作者:汪丙昂,趙振偉,孟新文【關(guān)鍵詞】環(huán)氧合酶 Expressionofcyclooxygenase2inthebrainsofnormaladultrats 【Abstract】AIM:Toobservetheexpressionofcyclooxygenase2(COX2)inthebrainsofnormaladultrats.METHODS:TheimmunohistochemicalABCmethodandtheCOX2polyclonalantibodyaladultrat
2、s.RESULTS:Therepus,thedentategyrus,thesupraopticnucleus,theamygdaloidnucleus,cerebellumandbrainstem,andsoon.TheCOX2immunopositivecellsainlyneurons,andafemunocytochemistry 【摘要】目的:觀察正常大鼠腦內(nèi)環(huán)氧合酶2(COX2)的表達.方法:用自行制備的COX2多抗采用免疫組織化學(xué)ABC法觀察了COX2蛋白在正常成年大鼠腦內(nèi)的表達.結(jié)果:在正常成年
3、大鼠腦內(nèi)COX2蛋白主要表達于皮層、海馬、齒狀回、視上核、杏仁核、小腦和腦干等部位,陽性細胞主要為神經(jīng)元,神經(jīng)膠質(zhì)細胞染色很少.結(jié)論:COX2蛋白在腦內(nèi)廣泛分布. 【關(guān)鍵詞】環(huán)氧合酶2;大鼠;免疫細胞化學(xué) 0引言 環(huán)氧合酶(COX)是前列腺素生成的限速酶,有兩個異構(gòu)體:環(huán)氧合酶1(COX1)和環(huán)氧合酶2(COX2).COX2具有重要的生物學(xué)作用,由其催化生成的前列腺素是機體內(nèi)重要的第二信使;COX2與神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)、突觸可塑性[1]以及痛覺敏感性[2]有關(guān),并被作為抗炎治療的靶標.但目前關(guān)于COX2蛋白在正常
4、大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達分布的報道還很少,而且COX2在神經(jīng)系統(tǒng)的許多重要功能的細節(jié)還有待進一步闡明.我們用COX2多抗觀察正常大鼠腦內(nèi)COX2蛋白的表達如下. 1材料和方法 1.1材料雄性SD大鼠6只,體質(zhì)量180~250g,由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供.聚苯乙烯ELISA板購自于美國Nunc公司.COX2的多克隆抗體由我們制備[3]. 1.2方法大鼠用10g/L戊巴比妥鈉(60mg/kg)麻醉后開胸,經(jīng)心灌流,先用100mL生理鹽水快速灌注沖洗血液,然后用預(yù)冷的40g/L多聚甲醛固定液400mL灌流.待固
5、定液滴注完畢,取出全腦,用40g/L多聚甲醛后固定2h,再放入200g/L蔗糖溶液,4℃過夜.組織塊完全沉底后用冰凍切片機連續(xù)冠狀切片,每5張取1張,腦片厚50μm.先將所有切片經(jīng)0.01mol/LPBS漂洗5min×3次后,浸入800mL/L甲醇和3mL/L過氧化氫封閉30min,0.01mol/LPBS漂洗10min×3次,再用10g/L牛血清白蛋白和30mL/L羊血清和3mL/LTritonX100封閉1h,用ABC方法進行免疫組化染色.免疫兔血清(1∶1000)作為一抗,孵育切片,室溫下36h,0.01m
6、ol/LPBS漂洗10min×3次;生物素化的羊抗兔IgG(1∶500,Sigma公司)孵育切片,室溫下4h,0.01mol/LPBS漂洗10min×3次;生物素卵白素辣根過氧化物酶復(fù)合物(ABC,1∶500,Vector公司)孵育切片,室溫2h,0.01mol/LPBS漂洗10min×3次;硫酸鎳胺加強DAB藍色反應(yīng)呈色.當(dāng)陽性產(chǎn)物呈深藍色而背底幾乎無色時終止反應(yīng).經(jīng)脫水、透明和封片后,OlympusBH2顯微鏡鏡檢.部分切片用做免疫組化方法對照實驗,一抗用牛血清白蛋白稀釋液替代,二抗、ABC復(fù)合物同其他免疫組
7、化反應(yīng)切片,結(jié)果未見陽性.2結(jié)果 在正常成年大鼠腦內(nèi)COX2的分布比較廣泛(圖1).陽性細胞主要為神經(jīng)元,沒有見到明顯的膠質(zhì)細胞呈現(xiàn)COX2免疫陽性染色.但是還有一些不明類型的細胞也表達COX2. A:皮層;B:海馬;C:齒狀回;D:小腦;E:杏仁核;F:下丘腦視上核. 圖1COX2在正常成年大鼠腦內(nèi)的表達ABC×140(略) 在大腦皮質(zhì),COX2陽性細胞為神經(jīng)元樣形態(tài),皮質(zhì)6層均有分布,陽性細胞胞體呈錐形、類圓形或不規(guī)則形,突起較長.其中外顆粒層和內(nèi)、外錐體層的細胞染色最強,突起明顯.而其余各層的陽性細
8、胞染色很淡,突起也不明顯.海馬CA1CA4區(qū)許多細胞為COX2免疫陽性,陽性細胞染色中等,形態(tài)不規(guī)則;齒狀回也有許多顆粒細胞呈現(xiàn)明顯的COX2陽性染色.正常大鼠的視上核也有許多細胞呈現(xiàn)COX2陽性染色,染色中等,細胞形態(tài)多數(shù)為神經(jīng)元樣.丘腦背側(cè)核群、下丘腦視前區(qū)和室旁核也有散在分布的染色很淡的陽性細胞,杏仁核也有少量細胞呈現(xiàn)COX2陽性染色.中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)和藍斑均有C