伽瑪?shù)秾?duì)紅藻酸致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響論文

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1、伽瑪?shù)秾?duì)紅藻酸致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響論文【摘要】目的:觀察丁酸鈉對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及NDRG1蛋白表達(dá)的影響.方法:采用0.5mmol/L丁酸鈉作用于食管癌EC9706細(xì)胞,用MTT法檢測(cè)處理不同時(shí)間時(shí)細(xì)胞增殖的變化，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化，采用免疫組化方法檢測(cè)NDRG1蛋白表達(dá)的變化.結(jié)果:①M(fèi)TT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丁酸鈉作用1～5d時(shí)各組吸光度均低于對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性意義（P0.05）；丁酸鈉不同作用時(shí)間的細(xì)胞增殖抑制率分別為：1d組21.2%，3d組23

2、.5%，5d組25.6%，且隨作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制率升高.②細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果為（%）:G1期細(xì)胞:對(duì)照組57.00±1.10.freelicaheidelberg公司），RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基（GibcoBRL公司）,胎牛血清（杭州四季青生物工程公司），羊抗人NDRG1多克隆抗體（SantaCruz生物技術(shù)公司），丫啶橙(Sigma公司)，CO2孵育箱（美國(guó)FormaScientific公司），流式細(xì)胞儀（德國(guó)PartecPAS公司），F(xiàn)ax250酶標(biāo)儀（英國(guó)Stat公司）.1.2方法1.2.1細(xì)胞培

3、養(yǎng)將人食管癌EC9706細(xì)胞單層貼壁生長(zhǎng)于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，種植于含蓋玻片的六孔板及75cm2培養(yǎng)瓶中.37℃,50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔日換液，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn).1.2.2MTT實(shí)驗(yàn)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的EC9706細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為7.5×107/L,按每孔0.2mL接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中.設(shè)空白對(duì)照組和0.5mmoL/L丁酸鈉實(shí)驗(yàn)組,每組均設(shè)10個(gè)復(fù)孔.實(shí)驗(yàn)終止前4h向細(xì)胞液中加入MTT20μL,細(xì)胞被染色后以二甲亞砜200μL溶解甲瓚顆粒,于酶標(biāo)儀上

4、測(cè)定A492nm.實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次.細(xì)胞抑制率=［(A對(duì)照-A實(shí)驗(yàn))/A對(duì)照］×100%.1.2.3丁酸鈉處理及細(xì)胞周期檢測(cè)用RPMI1640培養(yǎng)液將丁酸鈉調(diào)終濃度為0.5mmol/L,對(duì)照組為不含丁酸鈉的培養(yǎng)液.取丁酸鈉作用1,3,5d的細(xì)胞爬片及對(duì)照組細(xì)胞爬片從六孔板取出后經(jīng)pH7.4的PBS沖洗，800mL/L丙酮固定30min后用中性樹膠黏于載玻片上，4℃保存，用于免疫組化實(shí)驗(yàn).分別取丁酸鈉作用1,.freelL/L乙醇1.0mL固定細(xì)胞用于細(xì)胞周期測(cè)定.上機(jī)前將細(xì)胞離心洗滌制成單細(xì)胞懸液,加丫啶橙

5、染色,暗室放置,300目尼龍膜過濾,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布.1.2.4細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色采用SP試劑盒進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn).按說明書步驟進(jìn)行操作，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，光鏡觀察細(xì)胞顯色強(qiáng)度.結(jié)果判定：在高倍鏡下觀察免疫組化著色情況，以信號(hào)強(qiáng)弱評(píng)定NDRG1表達(dá)的強(qiáng)弱.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)均采用x±s表示,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05.2結(jié)果2.1MTT檢測(cè)不同時(shí)間的各組平均吸光度值均低于對(duì)照組，其差異有顯著性意義（P0.05，表1）；隨丁酸鈉作用時(shí)間延長(zhǎng)，其抑制率升高.

6、表1丁酸鈉對(duì)人食管癌細(xì)胞EC9706的增殖抑制作用確良（略）2.2丁酸鈉對(duì)食管癌細(xì)胞細(xì)胞周期的影響實(shí)驗(yàn)組G1期細(xì)胞比例與對(duì)照組比較明顯增高,而S,M期細(xì)胞比例減少，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異有顯著性意義（P0.01,表2）.表2丁酸鈉對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞周期的影響（略）2.3丁酸鈉對(duì)食管癌細(xì)胞NDRG1蛋白表達(dá)的影響免疫組化染色結(jié)果顯示，在作用1～5d時(shí)，細(xì)胞胞質(zhì)黃色著色較對(duì)照組明顯加深，且隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)（圖1）.3討論食管癌是人類常見的消化道惡性腫瘤，食管癌的治療方法除手術(shù)治療、放療等方法外，還有許

7、多新的治療方法，如基因治療、免疫治療、抗血管生成治療、誘導(dǎo)分化治療等［6］.其中誘導(dǎo)分化治療是腫瘤化學(xué)治療的一個(gè)新領(lǐng)域.誘導(dǎo)分化是指惡性腫瘤在體內(nèi)外分化誘導(dǎo)劑存在下，細(xì)胞惡性行為降低，惡性表性發(fā)生改變，形態(tài)學(xué)趨于正常，呈現(xiàn)出向良性或趨向良性細(xì)胞分化的現(xiàn)象.利用分化誘導(dǎo)劑可使腫瘤細(xì)胞部分或全部恢復(fù)分化潛能，轉(zhuǎn)變?yōu)檎＜?xì)胞或?qū)е录?xì)胞凋亡，從而達(dá)到治療腫瘤的目的.我們的結(jié)果表明，丁酸鈉作用1～5d后細(xì)胞增殖的抑制率由17.4%增加到23.8%，表明丁酸鈉可抑制食管癌細(xì)胞增殖，實(shí)驗(yàn)中增高丁酸鈉濃度至1mmol/

8、L2～3d（結(jié)果未列出），可見培養(yǎng)的細(xì)胞死亡顯著增多，說明其抑制率隨丁酸鈉濃度增加而升高；其增殖抑制作用與丁酸鈉使食管癌EC9706細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生變化有關(guān)，丁酸鈉可使G1期細(xì)胞增加；S期細(xì)胞比例、M期細(xì)胞比例顯著降低，從而使細(xì)胞增殖周期延長(zhǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖減慢.丁酸鈉作用于食管癌EC9706細(xì)胞后，NDRG1的蛋白表達(dá)水平顯著升高，而升高NDRG1基因表達(dá)可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)其分化［4-5］，因此丁酸鈉對(duì)食管癌細(xì)胞的增殖抑制作用可能