高效液相色譜法測(cè)定山楂葉中槲皮素的含量論文

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1、高效液相色譜法測(cè)定山楂葉中槲皮素的含量論文權(quán)迎春關(guān)麗萍鄭光浩【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法摘要：目的建立山楂葉中高效液相色譜(HPLC)法的含量測(cè)定方法。方法采用HPLC對(duì)槲皮素進(jìn)行定量測(cè)定；采用YMCpackODSA(4.6mm×250mm,5μm)，色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為370nm。結(jié)果色譜條件為流動(dòng)相甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)；柱溫25℃；流速0.8mlmin1，此法線(xiàn)性范圍0.08～0.32μg，r=0.9992，方法的精密度RSD為1.04%(n=5)。平均回收率為96.75%，RSD=1.67%(n=5)。結(jié)論此方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性好，可以

2、作為山楂葉中槲皮素含量測(cè)定方法。關(guān)鍵詞：山楂葉；高效液相色譜法；槲皮素；含量測(cè)定Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofquercetininhainedbyHPLC.YMCODSA(4.6mm×250mm,5μm)column.ResultsThemobilephaseconsistedofmethanol0.2%phosphaticacid(50∶50)lmin1andcolumntemperatureat25℃.ThemethodethodRSDethodapp

3、earedtobesimple,highlyaccurate.Itcanbeusedfortheappeareddeterminationofquercetininhaination山楂葉為薔薇科植物山里紅CrataeguspinnatifidaBge.Var.majorN.E.Br.或山楂CrataeguspinnatifidaBge的干燥的葉.freelm×250mm,5μm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)；柱溫：25℃；流速：0.8mlmin1。2.2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取槲皮素對(duì)照品配制成一定濃度的甲醇溶液，在200～500nm

4、波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，確定370nm做為測(cè)定波長(zhǎng)。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制2.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱(chēng)取槲皮素對(duì)照品8.9mg，置于50ml量瓶中，加入甲醇溶解，定容于50ml，然后精密吸取1ml置于10ml容量瓶中定容，備用。2.3.2線(xiàn)性范圍取上述槲皮素對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5.0，7.5，10.0，12.5，15.0，17.5μl，按色譜條件測(cè)定峰面積積分值，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)吸收曲線(xiàn)，得槲皮素(C)與峰面積(A)的關(guān)系，C=599370－1.628245A，相關(guān)系數(shù)r=0.9992。結(jié)果表明，槲皮素溶液濃度在0.08～0

5、.32μg內(nèi)，槲皮素峰面積(A)與濃度(C)之間呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。圖1HPLC色譜圖2.4精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品供試液，按“2.1”項(xiàng)下條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，10μl/次，測(cè)定峰面積積分值計(jì)算RSD值，結(jié)果RSD=1.04%，說(shuō)明儀器和色譜條件均具有良好的精密度。2.5重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取藥品粉末0.5g共5份，按“2.8”項(xiàng)下樣品溶液的制備操作，按“2.1”項(xiàng)下條件連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20μl，測(cè)定峰面積計(jì)算得RSD=1.35%，結(jié)果顯示，該方法具有較好的重現(xiàn)性。2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在室溫條件下，將樣品按測(cè)定方法處理后，分別在0，0.

6、5，1.0，1.5，2.0h每次進(jìn)樣20μl，測(cè)得峰面積計(jì)算RSD=0.84%（n=5）。結(jié)果表明，該溶液含量基本保持不變。2.7回收率實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取樣品0.5g共10份，其中5份按2.8項(xiàng)下測(cè)定樣品本底含量，5份各加入槲皮素對(duì)照品溶液適量，溶解。按2.8項(xiàng)下采用高效液相色譜法測(cè)定槲皮素含量，計(jì)算回收率為96.75%，RSD為1.67%(n=5)。2.8山楂葉提取物中槲皮素含量的測(cè)定稱(chēng)取干燥并切成細(xì)段的山楂葉50g，用8倍量75%乙醇浸泡過(guò)夜，80℃水浴里回流3h，提取兩次，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮，獲山楂葉乙醇提取物粗粉，精密稱(chēng)取提取物100m

7、g，加入少量甲醇溶解，移入50ml量瓶中，定容，搖勻，用微孔濾膜過(guò)濾，作為供試液，精密移取供試液20μl，注入高效液相色譜儀，在370nm處測(cè)定峰面積，根據(jù)線(xiàn)性回歸方程，計(jì)算含量見(jiàn)表1。表1山楂葉中槲皮素含量測(cè)定的結(jié)果序號(hào)（略）3討論本實(shí)驗(yàn)利用高效液相法測(cè)定山楂葉中槲皮素的含量尚屬首次，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為山楂葉藥物的開(kāi)發(fā)提供了質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。