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1、雙氫青蒿素對人喉癌細胞HeP作者：孟宇，李焰，劉斌，吳軍正 【Abstract】AIM：ToobservethegroisininonHeP2cellsofthroatcancer.METHODS:CellproliferationisininisinininhibitedtheproliferationofHep2inatimeanddosedependentmanner.TheIC50ofthedrugagainstthecellsisinininhibitsthegros;cells;artemisinin;laryngealne
2、oplasms 【摘要】目的：雙氫青蒿素作用于人喉癌細胞（HeP2），觀察藥物對其生長抑制作用.方法：采用細胞計數(shù)法、MTT法、軟瓊脂克隆形成試驗等觀察、測定雙氫青蒿素對喉癌細胞（HeP2）的細胞增殖率、細胞群體倍增時間、雙氫青蒿素對HeP2細胞生長抑制作用的劑量－效應(yīng)曲線、時間－效應(yīng)曲線以及對該細胞克隆形成率的影響.結(jié)果：①細胞生長曲線顯示該細胞增殖活躍，生長穩(wěn)定，細胞群體倍增時間為247h；②雙氫青蒿素對Hep2細胞有明顯的生長抑制作用,其作用特點呈濃度依賴性，其IC50值為446684μg/L.時間－效應(yīng)曲線顯示：當作用時間在2
3、4~120h時，呈劑量依賴性關(guān)系及時間依賴性關(guān)系.③雙氫青蒿素藥物濃度分別為320、1000、3200、10000μg/L時，克隆形成率分別為1150、09、06和05（％）.結(jié)論：雙氫青蒿素對HeP2細胞增殖及其生長有顯著的抑制作用，隨著藥物作用時間的延長，對于細胞的生長抑制作用逐漸增強，表明雙氫青蒿素在喉癌的化學治療中對腫瘤細胞有直接的細胞毒作用. 【關(guān)鍵詞】腫瘤；細胞；青蒿素；喉腫瘤 0引言 腫瘤的形成是一個多因素、多階段、長期作用的過程，惡性腫瘤的形成是細胞生長與增殖的調(diào)控發(fā)生嚴重紊亂且復(fù)雜的過程.有資料表明，青蒿素及其衍
4、生物對鼠艾氏腹水瘤細胞和人Hela細胞有細胞毒活性.用青蒿琥酯處理的HepG細胞可見梯狀DNA和凋亡小體［1］.本實驗將雙氫青蒿素作用于HeP2細胞，觀察對其生長抑制作用，旨在探討抗腫瘤侵襲及腫瘤治療方面為臨床用藥的篩選奠定一定實驗基礎(chǔ). 1材料和方法 11細胞來源HeP2細胞系由第四軍醫(yī)大學秦都口腔醫(yī)學院口腔生物學教研室提供.細胞培養(yǎng)于含100mL/L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，體積分數(shù)為50mL/LCO2，37℃，飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng). 12主要實驗儀器、試劑雙氫青蒿素純品（分析純）由北京科泰新技術(shù)公司方輝藥業(yè)有限公
5、司提供,生理鹽水稀釋；MTT為Sigma公司產(chǎn)品；RPMI1640培養(yǎng)液、胰蛋白酶為Gibco產(chǎn)品. 13細胞增殖率測定取對數(shù)生長期HeP2細胞，常規(guī)消化后接種于24孔培養(yǎng)板，接種濃度為1×107個/L，計數(shù)法測定細胞增殖情況，實驗重復(fù)3次,取平均值作圖并計算細胞群體倍增時間.細胞群體倍增時間（DT）計算公式:DT(h)=t×lg2/(LgNt-lgNo)t代表細胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)時間，No及Nt分別代表對數(shù)生長期的起始和終止的細胞數(shù). 14雙氫青蒿素對HeP2細胞生長抑制作用的劑量－效應(yīng)曲線取對數(shù)生長期細胞，常規(guī)消化后以1×1
6、06個/L濃度接種于96孔培養(yǎng)板，24h后細胞貼壁.加入濃度為100～32000μg/L的6個濃度的雙氫青蒿素，對照組加入不含藥物的等體積RPMI1640培養(yǎng)液，每組分別設(shè)5個平行孔.常規(guī)培養(yǎng)5d，MTT比色法測定每組A490nm值.實驗重復(fù)3次，取均值作圖.以藥物劑量的對數(shù)為橫坐標，細胞存活率為縱坐標，繪制劑量－效應(yīng)曲線、時間效應(yīng)曲線計算IC50值. 15雙氫青蒿素對HeP2細胞生長抑制作用的時間－效應(yīng)曲線接種細胞與實驗加藥分組同14.分別于藥物作用1、2、3、4、5d后，MTT比色法測定每組A490nm值.實驗重復(fù)3次，取均值，繪
7、制時間－效應(yīng)曲線并計算IC50值. 16軟瓊脂克隆形成試驗采用雙層瓊脂培養(yǎng)法在24孔板中進行，底層含5mL/L瓊脂，每孔1mL，4℃凝固.對照組加入等體積RPMI1640培養(yǎng)液.每組分別設(shè)4個平行孔.實驗組雙氫青蒿素藥物濃度分別為320、1000、3200、10000、32000μg/L.常規(guī)培養(yǎng)2. 17數(shù)據(jù)處理與分析細胞生長存活率（%）=實驗組光吸收值÷對照組光吸收值×100%.IC50定義為使實驗組光吸收值下降至對照組的50%時的藥物濃度，應(yīng)用MicrosoftEXCEL軟件繪制劑量－效應(yīng)曲線，作圖法計算雙氫青蒿素對Hep2細
8、胞的IC50值. 2結(jié)果 21HeP2細胞生長曲線細胞生長曲線顯示該細胞增殖活躍，生長穩(wěn)定（Fig1），細胞群體倍增時間為247h，表明該細胞適合在觀察生長變化的實驗中應(yīng)用. 22雙氫青蒿素對Hep2
