珠子參皂苷對人早幼粒白血病hl

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1、珠子參皂苷對人早幼粒白血病HL作者：陳濤，胡衛(wèi)鞏仔鵬，翟文?！菊磕康奶接懼樽訁⒃碥諏L-60細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)分化作用及其機(jī)制。方法MTT比色法測定細(xì)胞增殖抑制作用;細(xì)胞涂片觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;硝基四氮唑藍(lán)(NBT)試驗(yàn)測定細(xì)胞還原能力;流式細(xì)胞儀(FCM)檢測細(xì)胞周期。結(jié)果72h后，最低、低、中、高濃度珠子參皂苷組的細(xì)胞增殖抑制率分別為51.86%，42.84%，49.13%，66.40%;細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)珠子參皂苷組67.1%細(xì)胞分化成熟;NBT還原能力明顯增強(qiáng);細(xì)胞被阻滯在G0/G1期。結(jié)論珠子參皂苷對HL-60細(xì)胞有一定的

2、增殖抑制和誘導(dǎo)分化作用，其作用機(jī)理可能與阻止細(xì)胞于G0/G1期有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】珠子參;皂苷;HL-60;分化珠子參Panaxjaplcusvarmajor又名扣子七，為五加科植物珠子參PanaxjaponicusC.A.Mey.var.major(Burk.)C.Y..Feng或羽葉三七PanaxjaponicusC.A.Mey.var.bipinnati-fidus(Seem)C.Y..Feng的干燥根莖，主要分布于東喜馬拉雅至我國西部山區(qū)[1]。它的根莖為藥材珠子參，具活血散瘀、補(bǔ)血止血、消腫止痛之功。目前已從珠子參各種屬珠子參根莖及

3、葉中共分離出25個(gè)皂苷，多數(shù)為三萜皂苷[2]。從結(jié)構(gòu)上分析，珠子參皂苷極可能具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的作用。但到目前為止，珠子參皂苷用于抗腫瘤方面的研究還非常少。本文以人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞株為對象，用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法，初步探討了珠子參皂苷抗癌及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的作用?！　?材料　　1.1細(xì)胞株人早幼粒白血病HL-60細(xì)胞株，購自上海中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫?！　?.2藥品與試劑珠子參，產(chǎn)于湖北省神農(nóng)架林區(qū)，經(jīng)宜昌市藥品檢驗(yàn)所鑒定。珠子參總皂苷提取方法見參考　　3結(jié)果　　3.1細(xì)胞毒作用結(jié)果見表1，可以看出，與陰性對照組相

4、比較，藥物作用24，48，72h后，珠子參皂苷各不同濃度組和陽性對照組的OD值均明顯小于陰性對照組，且均有顯著性差異(P<0.01)，說明珠子參皂苷有抑制HL-60細(xì)胞生長的作用。而且珠子參皂苷對HL-60細(xì)胞的生長抑制作用隨著藥物作用時(shí)間的延長，效果也隨之增強(qiáng)。由于珠子參皂苷對HL-60細(xì)胞抑制作用最低濃度組作用雖比高濃度組弱，但比低、中濃度組強(qiáng)，考慮到藥物濃度過高，對細(xì)胞有殺傷作用，以及有的中藥有雙向調(diào)節(jié)作用，所以選擇珠子參皂苷最低濃度(100μg/ml)作為珠子參皂苷濃度，以后所提到的珠子參皂苷組均為珠子參皂苷最低濃度組。表1

5、不同藥物在不同時(shí)間對HL-60細(xì)胞生長的影響與陰性對照組比較，*P<0.01;n=5　　3.2細(xì)胞形態(tài)分級本次實(shí)驗(yàn)顯示，在藥物作用72h后，光鏡下陰性對照組中的HL-60細(xì)胞呈原始未分化狀態(tài)，體積大而圓，胞漿較少，含有少量嗜天青顆粒，胞核大、圓形或橢圓形，染色質(zhì)細(xì)，核仁大而圓，常為2～3個(gè)，而陽性對照組和珠子參皂苷組的大部分細(xì)胞分化為中、晚幼粒細(xì)胞，胞體變小，呈圓形或橢圓形，胞核小，核仁減少或消失，核染色質(zhì)變粗，核/漿比例下降，胞漿中出現(xiàn)特異性顆粒，部分呈桿狀核和分葉核細(xì)胞，見圖1～5。各組細(xì)胞形態(tài)分化率見表2，從此表可以看出，與陰

6、性對照組相比，陽性對照組和珠子參皂苷組的早幼粒細(xì)胞比值明顯下降(P<0.01);而中幼粒細(xì)胞和晚粒細(xì)胞比例都明顯增高(P<0.01)，且出現(xiàn)桿狀核或分葉核細(xì)胞，說明HL-60細(xì)胞在珠子參皂苷作用下從形態(tài)學(xué)方面向成熟細(xì)胞方向的改變。表2不同藥物對HL-60細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響　　3.3NBT細(xì)胞還原能力由表3可以看出，藥物作用72h后，陽性對照組NBT陽性細(xì)胞占73.9%，珠子參皂苷組NBT陽性細(xì)胞占62.3%，與陰性對照組(7.1%)相比較，陽性對照組和珠子參皂苷組NBT陽性細(xì)胞均明顯增多(P<0.01)。說明HL-60細(xì)胞在

7、珠子參皂苷的作用下，在功能和生化學(xué)變化方面向成熟細(xì)胞方向的改變。表3不同藥物對HL-60細(xì)胞NBT還原能力的影響　　3.4FCM周期分析流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明，在藥物作用72h后，陽性對照組和珠子參皂苷組的G0/G1期細(xì)胞都增多(61.78%，48.62%)，S期細(xì)胞都減少(18.42%,30.38%)，與陰性對照組(39.64%，37.52%)相比有顯著性差異(P<0.01)。說明珠子參皂苷和ATRA都可使HL-60細(xì)胞阻斷在G0/G1期，使DNA合成受抑制，從而干擾了HL-60細(xì)胞在細(xì)胞周期中的進(jìn)程。結(jié)果見表4。而且從增殖指數(shù)的

8、變化可以看出，珠子參皂苷可以抑制細(xì)胞增殖。DNA含量分布圖見圖6。表4不同藥物對HL-60細(xì)胞周期影響　　4討論　　HL-60細(xì)胞最大特點(diǎn)是在分化誘導(dǎo)劑作用下可向粒細(xì)胞系統(tǒng)或巨噬細(xì)胞系統(tǒng)兩個(gè)方