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《膽鹽輸出泵在膽道梗阻-再通大鼠肝組織中的表達(dá)及意義》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、膽鹽輸出泵在膽道梗阻?再通大鼠肝組織中的表達(dá)及意義祝建勇別平陳應(yīng)果馮春林唐春吳喬 【摘要】目的探討膽鹽輸出泵(BSEP)在膽道梗阻?再通大鼠肝組織中的表達(dá)及意義。方法將54只ias99病理圖像分析系統(tǒng)半定量檢測BSEP的平均積分光密度(IOD)，與TBA和TNF?α作相關(guān)分析。結(jié)果CBDL術(shù)后大鼠血清ALT，TBA及TNF?α顯著增高(P<0.05)；BR術(shù)后上述指標(biāo)逐步好轉(zhuǎn)，7d時仍顯著高于Sham組水平(P<0.05)。BSEPmRNA水平隨著梗阻時間的延長明顯降低(P<0.05)，CBDL術(shù)后14d僅微弱表達(dá)，梗阻
2、解除后緩慢增高；BR術(shù)后7d仍未恢復(fù)至Sham組水平。免疫組化染色顯示BSEP表達(dá)定位于肝細(xì)胞膜上，變化規(guī)律與前述一致，并且與TBA和TNF?α呈顯著負(fù)相關(guān)(r1=-0.9257，r2=-0.8536，P<0.05)。結(jié)論膽道梗阻?再通大鼠模型中膽鹽的代謝與BSEP水平密切相關(guān)，而TNF?α可能是影響B(tài)SEP變化的重要因素。【關(guān)鍵詞】膽鹽輸出泵腫瘤壞死因子?α膽道梗阻再通肝組織大鼠【Abstract】ObjectiveToexploretheroleofbilesaltexportpump(BSEP)inratliveraleean
3、BSEP?IODi?quantitativelybyusingMias99pathologicalimageanalysissystem.MeanTBAandTNF?αed.ResultsAfterCBDL,levelsofserumALT,TBAandTNF?αgroupsevendaysafterbilerefloRNAdecreasedasbileductobstructionelongated(P<0.05),increasedslogroupsevendaysafterBR.Immunohistochemistryresu
4、ltsshoilartendencytoabove?mentionedchange,ie,expressionofBSEPembrane,ayberesponsibleforbilesaltmetabolisminratmodelofbileductobstructionandbilerefloportantroleinregulatingBSEPexpression.【Keyp;Tumornecrosisfactorα;Biliarytractobstruction;Recanalization;Livercells;Rats膽酸(鹽)
5、是肝臟分泌到膽汁中最大量的有機酸，是膽汁的主要成分。膽道梗阻時高膽酸(鹽)血癥一方面會導(dǎo)致氧自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化物增加，損害生物膜功能，導(dǎo)致線粒體呼吸鏈功能障礙和氧化磷酸化紊亂；另一方面會引發(fā)腸道細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥，進(jìn)一步誘導(dǎo)機體免疫抑制、胃腸道黏膜損傷甚至急性腎功能衰竭，從而形成惡性循環(huán)［1］。臨床上部分重度淤膽患者在膽道梗阻解除后黃疸消退仍緩慢甚至發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥。膽鹽輸出泵(bilesaltexportpump，BSEP)是位于肝細(xì)胞膜上介導(dǎo)其底物依賴ATP自細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運至毛細(xì)膽管的一種膜糖蛋白，而膽酸(鹽)是其合適底物［2］。本
6、研究觀察BSEP在膽道梗阻及再通大鼠肝組織中的表達(dá)變化，探討其在膽酸(鹽)代謝中的作用。1材料與方法1.1動物模型建立［3］健康雄性)組、膽總管結(jié)扎(monbileductligation，CBDL)組和膽道再通(bilereflom的硅膠管架橋行膽總管?十二指腸內(nèi)引流術(shù)。Sham組只游離出膽總管，不結(jié)扎。1.2標(biāo)本制備各時相點大鼠均于后腔靜脈穿刺取血4～5ml，冰浴，離心15min(4℃，3000r/min)，取上清液置于-70℃保存待測；同時經(jīng)門靜脈灌注生理鹽水沖去血液，取肝組織切成約1.0cm×0.5cm×0.5cm大小，分別置入4
7、%多聚甲醛中待病理切片和液氮中待總RNA提取。1.3檢測指標(biāo)及方法(1)血清學(xué)指標(biāo)的檢測：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽汁酸(TBA)以及腫瘤壞死因子(TNF?α)分別按照試劑盒說明在紫外分光光度計和自動γ計數(shù)器上測定。(2)逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測BSEPmRNA水平：①采用Tripure試劑一步法提取肝組織勻漿總RNA，1%甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳鑒定，紫外分光光度計測定純度并定量；②逆轉(zhuǎn)錄擴增按RT?PCR試劑盒(美國Promega生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))說明書在GeneAmp2700PCR儀(美國PerkinElmer有限責(zé)任公司生產(chǎn))中進(jìn)
8、行，自行設(shè)計BSEP引物序列：上游為5'?CAACGCATTGCTATTGCTCG?3'，下游為5'?GTTCTGGATGGTGGACAAACG?3'，內(nèi)參照β?actin引物序列：上游為5'
