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《黃連多糖含量測定及抗氧化活性研究 》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、黃連多糖含量測定及抗氧化活性研究吳玉娟王懿萍姜延偉，姜怡【摘要】 目的比較3種pH值條件下提取的黃連多糖的含量及抗氧化活性差異。方法采用蒽酮－硫酸法測量黃連多糖的含量。分別測定黃連多糖對·OH，O2-·，DPPH的抗氧化活性。結(jié)果黃連藥材中多糖含量為：堿提取多糖>水提取多糖>酸提取多糖。抗氧化研究結(jié)果表明，在pH值中性條件下，水提取多糖經(jīng)木瓜酶與Sevag法除蛋白得到的多糖在抗氧化實驗中顯示出較好的效果，對·OH的EC50為83.913μg/ml，對DPPH的EC50為249.856μg/ml，對O2-·則無明顯的抑制作用。結(jié)論黃連多糖可作為抗氧化劑，具
2、有較好的清除自由基的作用?！娟P(guān)鍵詞】黃連多糖含量測定抗氧化活性 Abstract：ObjectiveToparethedifferencesofcontentandantioxidantactivityofCoptischinensispolysaccharidesbetethodentshoethodhadbettereffect.EC50ofPSA3against·OHl，andagainstDPPHl.ButPSA3hadnoeffectagainstO2-·.ConclusionCoptischinensishasfreeradicalscavenginga
3、ctivityandcanbeusedasaantioxidant. Key-1）?！ ?.2儀器 TU1901紫外-可見分光光度計，北京普析；FA1004-53423電子天平(0.0001g)，上海精科；TDL-5-A低速大容量離心機，上海安亭；DZF-6030B真空干燥箱，上海齊欣。KL-UP超純水器，成都優(yōu)普；PHS-3C型pH計，上海雷磁；JJ-1A60/20。式中C為測得的樣品溶液的葡萄糖質(zhì)量濃度(μg/ml)，D為樣品溶液的稀釋倍數(shù)，V為供試液體積(ml)，為醇沉后得到的多糖的質(zhì)量(g)。 2.3抗氧化活性研究 2.3.1黃連多糖對·OH的抑制作用
4、 原理：采用Fenton體系〔3〕測定黃連多糖對·OH的抑制作用?！H由EDTA-Fe-H2O2產(chǎn)生，由于·OH可特異性地使番紅花紅T褪色，根據(jù)褪色程度可以衡量·OH生成量。經(jīng)波長掃描，反應(yīng)體系在554nm處有最大吸收。 方法：在具塞試管中依次加入100μg/ml番紅花紅T2ml，0.2mol/LpH7.4的PBS2ml，100μg/ml供試液2ml，0.3%H2O22ml，0.15mmol/LEDTA-Fe2+2ml，混勻后37℃水浴30min。抑制率(E)=(A樣品-AEmin)/(AEmax-AEmin)，式中Emin為以水代替供試液，Emax為以水代替供
5、試液和EDTA-Fe2+?！ ?.3.2黃連多糖對O2-·的抑制作用 原理：鄰苯三酚在堿性條件下能迅速自氧化，釋放出超氧陰離子，生成的中間產(chǎn)物在紫外區(qū)有吸收〔4〕。經(jīng)波長掃描，在320nm處有最大吸收。經(jīng)時間掃描，該反應(yīng)在4min后趨于平緩?！ 》椒ǎ涸诰呷嚬苤幸来渭尤?00μg/ml供試液4ml，0.05mol/LpH8.2的Tris-HCl4ml，37℃水浴預(yù)熱10min，再加入4mN－1mN鄰苯三酚－鹽酸溶液1ml，混勻后在37℃水浴中以跑表計時準確反應(yīng)4min，立即用6mol/LHCl1ml終止反應(yīng)。抑制率(E)=(AEmax-A樣品)/(AEmax-AE
6、min),式中Emin為以水代替供試液、Tris-HCl，Emax為以水代替供試液?！ ?.3.3黃連多糖對DPPH的清除作用 原理：DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)是一種帶有不配對電子的比較穩(wěn)定的自由基，其N原子上有一個游離電子。DPPH的40%乙醇-水溶液在526nm處有最大的吸收峰。加入抗氧化劑后，DPPH捕捉一個電子與游離電子配對，在526nm處的吸收減弱〔5，6〕?！ 》椒ǎ涸谧厣萘科恐屑尤?00μg/ml供試液6ml，60μg/mlDPPH醇溶液4ml中，混勻后在室溫下反應(yīng)30min。對DPPH自由基的清除率(E)
7、=(AEmax-A樣品)/AEmax，式中Emax為以水代替供試液?！ ?結(jié)果與結(jié)論 3.1結(jié)果 3.1.1標準曲線的制備及含量測定通過蒽酮－硫酸法測得實驗結(jié)果（見表2），標準曲線方程為Y=0.0069X+0.0004，r2=0.9997，線性范圍：15.07～131.01μg/ml。表2黃連多糖純度及含量測定結(jié)果（略） 3.1.2黃連多糖對·OH的抑制作用 實驗結(jié)果表明，9種多糖水溶液對·OH的生成均有較強的抑制作用，見圖1?！ ∫圆煌瑵舛鹊腜SA3作量效關(guān)系實驗(見表3)。采用SPSS13.0軟件作概率單位回歸(ProbitAnalysi
