實(shí)驗(yàn)二-細(xì)菌基本形態(tài)及特殊結(jié)構(gòu)觀察

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1、實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌基本形態(tài)和特殊結(jié)構(gòu)觀察一目的要求1了解普通光學(xué)顯微鏡原理及構(gòu)造。2學(xué)習(xí)并掌握普通光學(xué)顯微鏡油鏡的正確使用方法?！?用油鏡觀察細(xì)菌基本形態(tài)。4了解負(fù)染色原理、細(xì)菌芽孢染色基本原理，油鏡觀察細(xì)菌的莢膜、芽孢形態(tài)。5細(xì)菌運(yùn)動性觀察。二基本原理１　普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)２　普通光學(xué)顯微鏡的光學(xué)成象原理3莢膜染色4芽孢染色１　普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)（1)　機(jī)械系統(tǒng)包括鏡座、鏡臂、載物臺、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡筒及調(diào)節(jié)器等（2)　光學(xué)系統(tǒng)包括反光鏡、聚光器、物鏡、目鏡等。２　普通光學(xué)顯微鏡的光學(xué)成象原理（1）顯微鏡的放大倍數(shù)放大倍數(shù)：目鏡的放大倍數(shù)與物鏡的放大倍數(shù)之乘積。目鏡：物鏡低倍鏡：10X高被鏡：

2、40X油鏡：100X10X100X目鏡物鏡⑵　顯微鏡的分辨率油鏡比低倍鏡、高倍鏡觀察物體更清晰。原因：◆油鏡分辨率高于低倍鏡、高倍鏡◆油鏡匯聚光線的能力大于低倍鏡、高倍鏡◆分辨率是指顯微鏡能夠分辨的最小距離即鑒別限度（R）R=λ∕（2NA）(λ為入射光波波長；NA為顯微鏡數(shù)值孔徑)NA=η.sinθη為標(biāo)本、物鏡之間介質(zhì)的折射率。θ為光軸上物點(diǎn)發(fā)出的光線與物鏡有效直徑兩端最大夾角角度的一半。η低倍鏡=η高倍鏡=η空氣=1.0，η油鏡η香柏油=1.52θ低倍鏡<θ高倍鏡<θ油鏡，sinθ低倍鏡

3、聚光線的能力油鏡高于低倍鏡、高倍鏡。3莢膜染色主要成分多為糖類，無色透明且不易著色常用負(fù)染色觀察。負(fù)染色是將細(xì)菌細(xì)胞和背景著色，從而把無色透明、不著色的莢膜結(jié)構(gòu)襯托顯現(xiàn)出來。菌體莢膜菌膠團(tuán)：多個菌體的莢膜融合為一個團(tuán)狀物，內(nèi)有多個菌體。菌膠團(tuán)4芽孢染色細(xì)菌芽孢壁厚而致密，透性低，難于染色，但一旦被染色又難于脫色。因此先用強(qiáng)著色力的染料（孔雀綠）處理，并同時加熱，使菌體以及芽孢均著色，后使菌體脫色，而芽孢保留原色，經(jīng)復(fù)染（蕃紅），菌體與芽孢分別以不同顏色顯現(xiàn)。芽孢菌體菌體芽孢對有芽孢的菌體進(jìn)行簡單染色（只用一種染料染色）。菌體和芽孢著色情況如何？菌體芽孢三實(shí)驗(yàn)材料▲細(xì)菌基本形態(tài)標(biāo)本片：大腸桿菌

4、片枯草桿菌片八疊球菌片▲細(xì)菌特殊形態(tài)標(biāo)本片：枯草芽孢桿菌芽孢片▲示范片觀察：莢膜片觀察懸滴法觀察活細(xì)菌的運(yùn)動四實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及步驟1細(xì)菌基本形態(tài)觀察2細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察3懸滴法觀察活細(xì)菌運(yùn)動1細(xì)菌基本形態(tài)觀察學(xué)習(xí)油鏡的正確使用方法。用油鏡觀察——大腸桿菌枯草桿菌八疊球菌2細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察學(xué)習(xí)油鏡的正確使用方法。用油鏡觀察細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)——枯草芽孢桿菌芽孢（油鏡）鉀細(xì)菌莢膜（高倍鏡）（示范）莢膜菌體菌膠團(tuán)菌體芽孢3懸滴法觀察活細(xì)菌運(yùn)動懸滴片制好后，用低倍鏡調(diào)焦，換高倍鏡觀察。注意：視野中暗光觀察。運(yùn)動的菌體發(fā)亮。▲觀察前準(zhǔn)備：顯微鏡的準(zhǔn)備和調(diào)試視野明亮▲低倍鏡觀察▲高倍鏡觀察（此步可以省略）▲油鏡觀察：

5、加香柏油，油鏡頭浸入香柏油中后調(diào)焦▲顯微鏡油鏡頭的清洗和歸位（二甲苯清洗）油鏡使用主要步驟注意?。?！——顯微鏡調(diào)焦方法五實(shí)驗(yàn)報告繪大腸桿菌枯草桿菌八疊球菌形態(tài)示意圖繪枯草芽孢桿菌芽孢形態(tài)示意圖菌名：大腸桿菌放大倍數(shù)：16×100X細(xì)菌形態(tài)示意圖繪圖要求：①選擇形態(tài)典型的部分細(xì)菌細(xì)胞繪圖。②僅繪出細(xì)菌細(xì)胞輪廓，但不同細(xì)菌的細(xì)胞大小比例應(yīng)適宜，且形態(tài)上應(yīng)有所區(qū)分。③細(xì)菌與視野相對大小應(yīng)符合實(shí)際，應(yīng)將細(xì)菌細(xì)胞排布在視野中離開中心的部位（即繪空心圖）。必須注明菌名、放大倍數(shù)。思考題（1）觀察細(xì)菌染色片時應(yīng)如何調(diào)節(jié)光線？（即如何調(diào)亮光，如何調(diào)暗光）（2）油鏡觀測時，是否可以用除香柏油以外的其它液體作介

6、質(zhì)？