硒對砷染毒致雄性大鼠生殖損害的拮抗作用

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1、硒對砷染毒致雄性大鼠生殖損害的拮抗作用郭貴華，楊麗，沈振華，黃月娜【摘要】目的探討硒對高砷所致雄性大鼠生殖損害的拮抗作用。方法50只雄性ethods50malealereproductivetoxicity砷是一種自然界廣泛存在，并有類金屬特性的元素，其化合物主要以三氧化二砷、二硫化二砷（雄黃）、三硫化二砷（雌黃）、硫砷化鐵的形式存在。長期暴露在含砷高的環(huán)境中，可以引起急、慢性砷中毒、致畸、致突變和致癌作用，損傷人體心臟、肝臟、腎臟、皮膚、生殖等多個器官和系統(tǒng)。作為一種肯定的生殖毒物，近年來對于砷生殖毒性的研究逐漸得到重視，特別是對雄性生殖毒性的研究越來越多[1，2]。但硒對砷所致雄性

2、生殖毒性的拮抗作用報道較少，我們研究一定量的硒對砷化物的生殖毒性可能產(chǎn)生的影響，揭示硒對砷致雄性生殖損害拮抗作用的機制，并盡力找出最佳劑量，為砷中毒的預防和治療提供科學依據(jù)。1材料與方法1.1動物模型的建立健康雄性清潔級g/kg，取該LD50的1/10為劑量。砷組含150mg/LAs2O3去離子水；砷加低硒組飲含150mg/LAs2O3及0.5mg/L亞硒酸鈉的去離子水；砷加中硒組飲含150mg/LAs2O3及2.0mg/L亞硒酸鈉的去離子水；砷加高硒組飲含150mg/LAs2O3及4.0mg/L亞硒酸鈉的去離子水；對照組給予等量雙蒸水，方法相同。1.2檢測指標1.2.1動物體質(zhì)量、睪

3、丸和附睪質(zhì)量及其臟器系數(shù)參照文獻[3]方法檢測動物體質(zhì)量、睪丸和附睪質(zhì)量及其臟器系數(shù)。1.2.2精子計數(shù)、活動率及畸形率分析處死大鼠后，立即取一側附睪尾，置37℃4ml生理鹽水中剪碎，濾除組織碎片后，加1ml生理鹽水制備精子懸液，用血細胞計數(shù)板計數(shù)精子數(shù)，400倍光學顯微鏡下伊紅染色1～2min后鏡檢并計算精子活動率；取新鮮精子濾液2滴滴于載玻片上，室溫下自然干燥后經(jīng)甲醇固定，體積分數(shù)為2%伊紅染色3h后在400倍光學顯微鏡下觀察精子形態(tài)、計數(shù)畸形精子百分率（精子畸形以無鉤、大頭、香蕉形、雙頭、雙尾等為指標）。1.2.3睪丸、附睪生化標志酶測定制備睪丸、附睪組織勻漿，用南京建成生物工程

4、研究所的乳酸脫氫酶（LDH）和ATP酶測試盒檢測睪丸中的LDH和附睪中的ATP酶含量（單位用每小時每mg蛋白中有機磷的μmol表示）。1.2.4性激素測定處死大鼠前抽取下腔靜脈血，分離血清，用深圳拉爾文生物工程有限公司的血清睪酮（Testosterone,T）和血清促黃體生成激素（Luteinizinghormone,LH）放射免疫測定試劑盒測定血清睪丸酮和血清促黃體生成激素。1.2.5睪丸組織病理切片按照文獻方法[4]將睪丸組織切片固定、脫水、染色后于光鏡下觀察生精上皮細胞的層次、形態(tài)結構，脫落的細胞及管腔擁塞程度，支持細胞的數(shù)量與形態(tài)改變。1.2.6初級精母細胞染色體畸形分析參照文

5、獻方法[5]，染色體畸形主要包括染色體斷裂、斷片、裂隙及多倍體等。1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS（10.0）軟件包進行分析，計數(shù)資料以±s表示，采用t檢驗，計量資料用χ2檢驗。2結果2.15組大鼠睪丸組織病理學檢查對照組睪丸生精上皮細胞有5～8層，形態(tài)結構完整，管腔中無脫落的細胞，可見大量成熟精子(圖1)；砷組的各級生精細胞數(shù)量減少，結構疏松，成熟精子的數(shù)量減少(圖2)；砷加低硒組和砷加中硒組的各級生精細胞數(shù)量較砷組有所增加，形態(tài)結構較正常，間質(zhì)細胞的數(shù)量和結構也較正常，可見許多成熟精子(圖3，4)。砷加高硒組仍可見到各級生精細胞數(shù)量減少，管腔中有脫落的精子和組織，成熟精子數(shù)量減少(圖5

6、)。　　2.25組大鼠體質(zhì)量、睪丸和附睪質(zhì)量及其臟器系數(shù)（表1）2.35組大鼠睪丸、附睪生化標志酶含量測定結果（表2）2.45組大鼠精子計數(shù)、畸形率及活動率分析（表3）表15組大鼠右側睪丸和右側附睪質(zhì)量及其臟器系數(shù)比較與對照組比較，*P＜0.05表25組大鼠睪丸、附睪生化標志酶含量比較與對照組比較，*P＜0.05；與砷組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01表35組大鼠精子計數(shù)、畸形率和活動率比較與對照組比較，*P＜0.05；與砷組比較，△P＜0.05，△△P＜0.012.5初級精母細胞染色體畸形分析對照組初級精母細胞染色體畸形率為6.50%，砷組為9.90%，砷加低硒組為18.20%

7、，砷加中硒組為14.60%，砷加高硒組為17.30%，組間比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。2.65組大鼠血清性激素的檢測（表4）表45組大鼠血清性激素含量比較與對照組比較，*P＜0.05；與砷組比較，△P＜0.05，△△P＜0.013討論有關砷與生殖系統(tǒng)之間的關系，已受到人們的高度關注，不少資料表明，砷及其化合物具有遺傳毒性，可使染色體畸形率增高，姊妹染色體交換試驗頻率及微核率增加[6]。近年來人們已注意到砷的雄性生殖毒性問題，本研究結