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1、塞來(lái)昔布對(duì)體外宮頸癌細(xì)胞株Hela和Siha的抑制作用【摘要】目的：探討環(huán)氧化酶抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)Hela和Siha細(xì)胞株細(xì)胞周期及凋亡的影響。方法：采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)環(huán)氧化酶抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)人宮頸癌細(xì)胞株（Hela和Siha）細(xì)胞周期及凋亡的影響。結(jié)果：經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，隨著塞來(lái)昔布濃度的增加，Hela和Siha細(xì)胞周期中G0/G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，G２～M期細(xì)胞比例無(wú)明顯改變。與塞來(lái)昔布（≥25μmol/L）共同孵育72h后，與空白對(duì)照組相比PI指數(shù)減?。≒＜0.05），凋亡率增高（P＜0.05）。流式分析圖中可見(jiàn)亞二倍體凋亡峰。結(jié)論：環(huán)氧化酶抑制劑塞來(lái)昔布可抑制體
2、外人宮頸癌細(xì)胞株Hela和Siha的增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡?！娟P(guān)鍵詞】宮頸癌；塞來(lái)昔布；流式細(xì)胞術(shù)AbstractObjective:Tostudytheinhibitoryeffectsofcelecoxib,aselectivecyclooxygenase-2inhibitor,ontacelllinesinvitro.Methods:Theeffectofcellcycleandcellapoptoticratesetry(FCM).Results:ByFACS,itol/L）for72hours,theproliferationindexes(PI)mitinFACSgraph.Concl
3、usion:CelecoxibinhibitedtheproliferationandinducedtheapoptosisofSihaandHelacelllinesinvitro.Keyetry宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，是癌癥造成婦女死亡的第二位原因。近年來(lái)的研究表明，環(huán)氧化酶(COX)，尤其是COX-2，與多種上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切〔１〕，并發(fā)現(xiàn)COX抑制劑在抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮一定作用，但有關(guān)環(huán)氧化酶及其抑制劑與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展之間關(guān)系的研究較少，因此我們采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)人宮頸癌細(xì)胞株（Hela和Siha）增殖和凋亡
4、的影響，為進(jìn)一步探討COX抑制劑抗腫瘤作用的機(jī)制及其臨床應(yīng)用積累資料。1材料與方法1.1材料人宮頸癌細(xì)胞株Hela及Siha購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院婦產(chǎn)科實(shí)驗(yàn)室。培養(yǎng)基RPMI1640購(gòu)自GibcoBRL公司，小牛血清購(gòu)自杭州四季青生物公司，胰酶購(gòu)自sigma公司。塞來(lái)昔布購(gòu)自山西威爾克科技發(fā)展公司，并溶于100％二甲基亞砜中，存于4℃?zhèn)溆?。?xì)胞培養(yǎng)與流式細(xì)胞分析均于山西醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。1.2方法1.2.1細(xì)胞的培養(yǎng)：人宮頸癌細(xì)胞株（Hela和Siha）采用RPMI1640培養(yǎng)液，內(nèi)含10％滅活小牛血清，常規(guī)培養(yǎng)于37℃、5％CO2、飽和濕度的孵箱中，用0.25％胰酶消化傳代。1.
5、2.2與藥物共同孵育后經(jīng)流式細(xì)胞儀分析：選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞按1×105/mL的濃度接種于六孔培養(yǎng)板中，次日更換培養(yǎng)液后與不同濃度的塞來(lái)昔布共同孵育，使其終濃度分別為12.5μmol/L，25μmol/L，50μmol/L，并設(shè)相應(yīng)的空白對(duì)照組，空白對(duì)照組及各不同濃度組均做兩瓶。共同培養(yǎng)72h后胰酶消化（0.25％），收集細(xì)胞制成1×106/mL的單細(xì)胞懸液，加入4℃預(yù)冷的70％乙醇固定細(xì)胞，PBS漂洗2次，用1mLPBS液重新懸浮細(xì)胞，加碘化丙啶，避光染色20min后通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè),應(yīng)用DNA細(xì)胞周期分析軟件，計(jì)算出各樣品DNA含量，分析細(xì)胞周期及凋亡率。細(xì)胞的增殖活性以增殖指數(shù)(prol
6、iferativeindex,PI)表示，計(jì)算公式為:PI(%)=（S％+G2～M％）/（G0～G1％+S％+G2～M％）×100%。1.2.3統(tǒng)計(jì)方法：采用SPSSforWindow10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多個(gè)樣本均數(shù)間的比較用方差分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果塞來(lái)昔布對(duì)Hela和Siha細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響：如表1、表2所示，與各濃度的塞來(lái)昔布共同孵育72h后，隨著藥物濃度的增加，Siha及Hela細(xì)胞周期發(fā)生變化：G0～G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，G2～M期細(xì)胞比例無(wú)明顯改變。同對(duì)照組相比Siha及Hela細(xì)胞PI增殖指數(shù)減?。≒＜0.05），凋亡率增高（P＜0.05
7、），流式分析圖中可見(jiàn)亞二倍體凋亡峰（見(jiàn)表3，圖1、圖2）。表1塞來(lái)昔布對(duì)Siha細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響表2塞來(lái)昔布對(duì)Hela細(xì)胞株細(xì)胞周期的影響表3塞來(lái)昔布對(duì)Siha/Hela細(xì)胞株P(guān)I增殖指數(shù)及凋亡率的影響*與空白對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）3討論環(huán)氧化酶抑制劑屬于非甾體類(lèi)抗炎藥（NSAIDs），臨床上常用于消炎、鎮(zhèn)痛、解熱等治療。自100年前第一種NSAIDs藥物阿司匹林由Fel
