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《白藜蘆醇對(duì)人tenon27s囊成纖維細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文real-timePCRrealtimepolymerasechainreaction實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)EDTAEthylenediaminetetra-Aceticacid乙二胺四乙酸RNARibonucleicAcid核糖核酸RT-PCRreversetranscriptionpolymerase逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)chainreaction2華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文白藜蘆醇對(duì)人Tenon's囊成纖維細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制研究華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院眼科博士研究生：鄭恬導(dǎo)師：胡義珍教授中文摘
2、要第一部分白藜蘆醇對(duì)人Tenon's囊成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響目的：探討白藜蘆醇(RES)對(duì)行體外培養(yǎng)的人Tenon's囊成纖維細(xì)胞(HTFs)的增殖以及凋亡的影響，并比較在不同濃度白藜蘆醇及不同作用時(shí)間時(shí)，HTFs增殖和凋亡的變化情況。方法：取青光眼患者術(shù)中切下的Tenon's囊組織標(biāo)本，組織貼壁法行人Tenon's囊成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)，選取傳代后第3代或第6代細(xì)胞。1.MTT比色法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)HTFs增殖作用的影響:分別用10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml不同濃度的RES干預(yù)體外培養(yǎng)的HT
3、Fs，12h,24h,36h,48h不同時(shí)間觀察HTFs的增殖情況，并采用MTT比色法檢測(cè)HTFs的生長(zhǎng)活性。2.濃度為10ug/ml，20ug/ml，40ug/ml，80ug/ml的白藜蘆醇對(duì)體外培養(yǎng)的HTFs作用24h后，運(yùn)用AO-EB、Hochest33258染色及AnnexionV-碘化丙錠雙染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化。結(jié)果:1.MTT檢測(cè)法結(jié)果顯示：在濃度為10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml的白藜蘆醇干預(yù)體外培養(yǎng)的HTFs，作用時(shí)間為12h-48h時(shí)，與對(duì)照組相比，細(xì)胞生長(zhǎng)受到顯著抑制
4、（p<0.05），在該濃度和時(shí)間范圍內(nèi)，顯示為時(shí)間和劑量依賴性，即隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)和藥物濃度的增加，其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制程度也加強(qiáng)。濃度為10μg/ml，20μg/ml,40μg/ml,80μg/ml的白藜蘆醇作用12h細(xì)胞抑制率分別為9.62%，18.86%，29.05%，51.05%；作用24h，細(xì)胞抑制率分別為13.86%，23.53%，34.76%，3華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文18.86%，作用36小時(shí)分別為16.86%，29.17%，40.88%，62.72%，48h是則分別為23.18%，32.35%，59.20
5、%,，69.05%；2.AO/EB和Hochest33258染色法結(jié)果顯示：10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml白藜蘆醇作用體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞24h后，可見(jiàn)細(xì)胞細(xì)胞核固縮，或呈碎塊狀致密濃染，并隨著藥物濃度的增加，凋亡現(xiàn)象越明顯；3.AnnexinV-碘化丙錠雙染色流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果：濃度為10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml的白藜蘆醇干預(yù)體外培養(yǎng)的HTFs24小時(shí)，可促進(jìn)成纖維細(xì)胞的細(xì)胞凋亡，伴隨RES藥物濃度的增加，凋亡率與對(duì)照組相比顯著升高（P﹤0.05）。結(jié)論：在一定的
6、藥物濃度和作用時(shí)間范圍內(nèi)，白藜蘆醇可對(duì)體外培養(yǎng)的人筋膜囊的成纖維細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用，表現(xiàn)為劑量-時(shí)間依賴性，并可促進(jìn)細(xì)胞的凋亡，凋亡也呈劑量依賴性。關(guān)鍵詞：白藜蘆醇；人Tenon's囊成纖維細(xì)胞；增殖凋亡4華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文第二部分白藜蘆醇對(duì)人Tenon's囊成纖維細(xì)胞中TGF-β基因表達(dá)的影響目的：探討白藜蘆醇對(duì)人Tenon's囊成纖維細(xì)胞中TGF-β基因表達(dá)的影響。方法：組織貼壁法培養(yǎng)的人Tenon's囊成纖維細(xì)胞的分為對(duì)照組、藥物組，分別于正常培養(yǎng)及不同濃度藥物（10μg/ml，20μg/ml，40μg/
7、ml，80μg/ml）干擾條件下培養(yǎng)24h后，運(yùn)用westernblot和real-timePCR法檢測(cè)細(xì)胞中TGF-β1和TGF-β2的蛋白和mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：藥物組與對(duì)照組相比，TGF-β1和TGF-β2的蛋白和mRNA水平均有表達(dá)變化。與對(duì)照組比較，不同濃度藥物（10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml）干擾后，TGF-β1的蛋白水平降低了33.51%-62.21%（P<0.05），mRNA表達(dá)變化較對(duì)照組降低了40.12%-63.15%（P<0.05）；TGF-β2的蛋白水平降低了38.53
8、%-72.13%（P<0.05），mRNA表達(dá)變化較對(duì)照組降低了42.33%-68.16%（P<0.05）。結(jié)論：白藜蘆醇顯著抑制人Tenon's囊成纖維細(xì)胞中TGF-β1和TGF-β2的蛋白和mRNA的表達(dá)。關(guān)鍵詞：白藜蘆醇；人Tenon's囊成纖維細(xì)胞；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；基
