睪丸扭轉(zhuǎn)對(duì)大鼠生精能力的影響及維拉帕米的保護(hù)作用

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1、睪丸扭轉(zhuǎn)對(duì)大鼠生精能力的影響及維拉帕米的保護(hù)作用【摘要】目的:探討鈣離子通道拮抗劑(維拉帕米,verapamil)對(duì)大鼠睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后睪丸細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。方法:選用出生1個(gè)月左右的健康雄性ＳＤ大鼠30只,隨機(jī)平均分成3組，手術(shù)制作幼鼠睪丸扭轉(zhuǎn)模型（720°,2h）。對(duì)部分扭轉(zhuǎn)組應(yīng)用生理鹽水或鈣離子通道拮抗劑(維拉帕米)。術(shù)后6個(gè)月處死,取兩側(cè)睪丸標(biāo)本，測(cè)定睪丸NO含量、NOS活性，并制備細(xì)胞懸液，檢測(cè)記錄每樣本中單倍體細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比。結(jié)果:B組（扭轉(zhuǎn)組）單倍體細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)明顯下降，而且睪丸組織NO含量、NOS活性升高，維拉帕米

2、可減輕上述變化。結(jié)論:維拉帕米可以提高睪丸組織單倍體細(xì)胞的百分比，在一定程度上可以減輕睪丸組織損傷，對(duì)睪丸的生精能力有明顯的保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】睪丸扭轉(zhuǎn);維拉帕米;流式細(xì)胞術(shù);一氧化氮【ABSTRACT】Objective:Toinvestigatetheprotectiveeffectofverapamilonthetestisaftertesticulartorsioninrats.Methods:30healthymaleSpragueDanleyrats(onemonthold)lydividedequallyintothr

3、eegroups.Amodeloftesticulartorsion(720degree,2hours)alsalineorCa2+channalblocker(verapamil)inistratedintheinterventiongroups.Sixmonthslaters,nitricoxide(NO),nitricoxidesynthaseactivity(NOS)easuredinbothtestisoftherats.AndtheDNAcontenteasuredbyfloetry,thepercentageofmonopl

4、oidoreinthetorsiveside;ThepercentageofmonoploidsignificantlydecreasedintheBgroup(testiculartorsion),verapamilcouldreducetheextentofthesechanges.Conclusion:Theverapamilcouldraisethepercentageofmonoploidintestisandreducetheextentofdamages.【KEYedimachine及其配套產(chǎn)品制成單細(xì)胞懸液。用PBS分別洗

5、滌三次標(biāo)本，棄去上清液，用PBS調(diào)整細(xì)胞濃度到1.0×106細(xì)胞/ml。①分別取100μl樣本，加入CycleTestTMPlusDNA試劑盒A液250μl，輕輕搖勻不要震蕩，室溫靜置10min，②分別加入200μlB液，輕輕搖勻不要震蕩，室溫靜置10min，③分別加入200μlC液，輕輕搖勻不要震蕩，低溫（2～8℃）避光靜置10min。加入C液2h內(nèi)用流式細(xì)胞儀（FACScalibur)Cellquest軟件測(cè)定。用ModFITLTformacv3.0軟件分別進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,記錄每樣本中單倍體細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析按組別對(duì)

6、流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果予以方差分析,各組結(jié)果兩兩比較,所有結(jié)果以SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包處理。2結(jié)果2.1維拉帕米對(duì)睪丸扭轉(zhuǎn)NO含量及NOS活性影響B(tài)組NO含量、NOS活性，扭轉(zhuǎn)側(cè)和對(duì)側(cè)分別與正常對(duì)照組比較，NO含量、NOS活性均顯著升高（P＜0.05）；扭轉(zhuǎn)側(cè)較對(duì)側(cè)變化顯著（P＜0.05）。C組與B組扭轉(zhuǎn)側(cè)和對(duì)側(cè)分別比較，NO含量、NOS活性均降低（P＜0.05）(表1)。2.2維拉帕米對(duì)睪丸扭轉(zhuǎn)單倍體細(xì)胞的作用表1各組NO含量、NOS活性比較注：*P＜0.05，**P＜0.01，vscontrol；△P＜0.05，vsB組對(duì)側(cè);#P＜0.05，

7、vsB組扭轉(zhuǎn)；+P＜0.05，vsB組對(duì)側(cè)。A組、B組和C組單倍體細(xì)胞分別占細(xì)胞總數(shù)的(72.9±1.9)%、(50.6±2.2)%、和(68.1±1.6)%。各組結(jié)果兩兩比較,統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異均有顯著性意義,說(shuō)明青春期前睪丸扭轉(zhuǎn)影響大鼠性成熟后的生精能力,鈣通道拮抗劑(維拉帕米)在一定程度上可以減輕組織損傷。3討論正常睪丸組織有防御氧自由基損傷的機(jī)制，如SOD、GSH等能迅速清除O2－、OH－等自由基，而在再灌注組織中SOD、GSH等由于大量消耗從而降低，而NO在缺血再灌注損傷中具有雙重作用[2，3]。本實(shí)驗(yàn)表明，一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后（B組）

8、扭轉(zhuǎn)側(cè)和對(duì)側(cè)睪丸NO含量、NOS活性升高，扭轉(zhuǎn)側(cè)較對(duì)側(cè)變化顯著；說(shuō)明對(duì)側(cè)睪丸損傷是由于睪丸復(fù)位后再灌注損傷引起。NO過(guò)量產(chǎn)生是對(duì)側(cè)睪丸損傷的重要原因,與王曉康報(bào)道一致[4]。應(yīng)用維拉帕米后,N