新生大鼠大腦皮層少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的培養(yǎng)分離及鑒定

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1、新生大鼠大腦皮層少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的培養(yǎng)分離及鑒定.L.編輯?！菊浚勰康模萏接懶律╯praguedaaryculturefromneonatalratcerebralcorticesandstudythemethodsofcellcultureandisolationinordertoobtainpurifiedOPCsfortheexperimentsofcelltransplantation.［Method］Themixedglialcellsfromthecerebralcorticesof48houroldSpragueDaedium.

2、ThegroicroscopyandOPCsmunocytochemicaltechniques.［Result］ThedistinctstratificationofOPCsandastrocytesdevelopedaround9-10daysinprimaryculture.Atthispoint,theOPCsscatteredonthetopofthemonolayerastroctyesandthesomaofmostOPCstypicallyappearedovalorroundatureoligdendrocytesmunoreactiv

3、etothespecificantigenofoligodendrocytelineagecells,Oligo2.［Conclusion］OPCsseparatedfromthecerebralcorticesofneonatalSDratscanbemaintainedasimmatureprecursorcellsinculture,andOPCsareabletobepurifiedbyshakinganddifferentialadhesionundertheconditionofappropriatecellstratification.Ke

4、yyelination;spinalcordinjury脊髓損傷是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，可以造成患者嚴(yán)重的神經(jīng)功能損害。目前，臨床上尚無有效辦法治療脊髓損傷。隨著研究深入，人們對于脊髓損傷的病理過程有了更進(jìn)一步的認(rèn)識。脊髓損傷不僅導(dǎo)致神經(jīng)元丟失，同時還造成大量少突膠質(zhì)細(xì)胞的死亡，從而引起殘留神經(jīng)軸突的脫髓鞘改變，進(jìn)一步影響了脊髓神經(jīng)功能的恢復(fù)。近來不少研究顯示通過髓鞘形成細(xì)胞移植治療脊髓損傷，有利于脫髓鞘軸突的再髓鞘化，促進(jìn)損傷脊髓的神經(jīng)功能恢復(fù)［1,2］。研究表明，少突膠質(zhì)細(xì)胞不僅形成髓鞘包繞軸突，同時它還起著為其他神經(jīng)細(xì)胞提供營養(yǎng)因子、促進(jìn)軸突

5、生長等作用［3］。此外，少突膠質(zhì)前體細(xì)胞是處于分化早期階段的未成熟細(xì)胞，既能夠定向分化為成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞，同時又具有一定的增殖與遷移能力［4］，更加適合于細(xì)胞移植治療。因此，研究少突膠質(zhì)前體細(xì)胞移植治療脊髓損傷，促進(jìn)脫髓鞘軸突再髓鞘化具有重要的意義。經(jīng)體外培養(yǎng)獲得大量少突膠質(zhì)前體細(xì)胞是開展這些實驗研究的重要前提，故本實驗就如何獲得純化的少突膠質(zhì)前體細(xì)胞進(jìn)行初步探討。1材料和方法1.1材料出生48h的新生（spragueda細(xì)胞濾網(wǎng)、顯微解剖器械等。Dulbecco'sModifiedEagleMedia(DMEM)(GIBCO)，Hanks平衡鹽溶液(G

6、IBCO)，標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(TBD)，多聚賴氨酸(Sigma)，L-谷氨酰胺(GIBCO)，丙酮酸鈉(Amreseo)，牛胰島素(Sigma)，轉(zhuǎn)鐵蛋白(Sigma)，亞硒酸鈉(Sangon)，甲狀腺素(Sigma)，臺盼藍(lán)(Sigma)，兔抗人膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidprotein,GFAP)多克隆抗體(中杉金橋)，兔抗人少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子2(Oligodendrocytelineagespecifictranscriptionfactor,Oligo2)多克隆抗體(中杉金橋)，ABC試劑盒(中杉金橋)，DAB試劑盒(

7、中杉金橋)。基本培養(yǎng)基：DMEM含10％胎牛血清、0.6%葡萄糖、4mmol/L谷氨酰胺、5mmol/L丙酮酸鈉、50u／ml青霉素、50μg／ml鏈霉素。定向培養(yǎng)基：DMEM含0.5％胎牛血清、50μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白、5μg/ml胰島素、30nmol/L亞硒酸鈉、30nmol/L甲狀腺素、4mol/LL谷氨酰胺、5mmol/L丙酮酸鈉、50u／ml青霉素、50μg/ml鏈霉素。1.2少突膠質(zhì)前體細(xì)胞培養(yǎng)混合膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)：取新生48hSD大鼠，頸動脈放血，在體視顯微鏡下無菌取出大腦半球，切除腦干及海馬，徹底清除腦膜、血管等組織，轉(zhuǎn)入Hanks平衡鹽溶液

8、內(nèi)清洗皮層組織。用顯微解剖剪小心剪碎皮層至約1mm3大小的組織塊，輕柔吹打制成細(xì)