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1、iNOS在肝細胞癌組織中的表達及其臨床意義【關(guān)鍵詞】肝細胞癌iNOS 肝細胞癌（HCC）是我國常見惡性腫瘤之一，其死亡率占消化系統(tǒng)惡性腫瘤第3位。它的發(fā)生、發(fā)展是多種癌相關(guān)基因協(xié)同作用的結(jié)果。一氧化氮（NO）是體內(nèi)重要的生物活性分子和信號分子，它作為血管擴張因子、神經(jīng)遞質(zhì)、抗微生物效應(yīng)分子和免疫調(diào)節(jié)劑具有多種生理和病理功能。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）主要在病理情況下，如炎癥和腫瘤誘導(dǎo)下生成NO，參與血管生成、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展等過程〔1〕。本研究通過檢測HCC癌組織中的iNOS的表達情況及其與臨床生物學(xué)特點之間的關(guān)系，探討iNOS與HCC的關(guān)系?！ ?材料與方法 1.1研究對象 收
2、集了我院2003年3月～2008年1月普外科住院病例60例，其中男45例，女15例，年齡35～86（平均67）歲。全部病例均由組織學(xué)病理確診。按UICC(1997)分期,Ⅰ期5例,Ⅱ期12例,Ⅲ期25例,Ⅳ期18例。所有患者術(shù)前均未行放化療，隨訪時間為8～24個月。選取同期我院病理科正常肝組織7例（4例肝臟外傷，3例肝臟血管瘤）作為正常對照。所有組織均經(jīng)10％福爾馬林溶液固定后石蠟包埋?！ ?.2方法 iNOS兔抗人單克隆抗體和免疫組化（SABC法）試劑盒均為美國CaliforniaBiotechInc產(chǎn)品。免疫組化方法按試劑盒說明書操作：石蠟包埋組織切片4μm，60℃烤箱中過夜，二甲
3、苯脫蠟，梯度乙醇水化，過氧化物酶阻斷劑(0.3%過氧化氫甲醇)處理10min，以去除內(nèi)源性過氧化物酶，正常羊血清室溫封閉10min，加第一抗體于4℃冰箱過夜；加第二抗體(生物素化的羊抗兔抗體)室溫下作用10min，加鏈霉菌素親生物素蛋白——過氧化物酶溶液，室溫下作用10min。DAB顯色，自來水沖洗后蘇木精復(fù)染，脫水、透明中性樹膠封固。PBS代替第一抗體作為陰性對照，已知肝癌組織作為陽性對照?！ ?.3結(jié)果判定 細胞核和(或)細胞漿呈明顯棕黃色反應(yīng)即為陽性。陽性細胞計數(shù)：每個標本切片選取5個高倍(400×)視野作陽性細胞計數(shù);以超過10%細胞呈清晰棕褐色為陽性(+)，超過50%細胞呈清
4、晰棕褐色為強陽性()，低于10%表達或細胞無棕黃色染色為陰性(-)?！ ?.4統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)用率表示，采用SPSS11.5進行組間χ2檢驗。 2結(jié)果 2.1不同組織中iNOS的表達 HCC癌組織中iNOS的陽性表達率為61.7%，癌旁組織和正常肝組織中未見其陽性表達，兩組癌組織中的表達率差異顯著（P＜0.01）?！ ?.2iNOS的表達與HCC臨床特征的關(guān)系 iNOS的表達與HCC的發(fā)病年齡、性別、腫瘤大小、UICC分期及甲胎蛋白(AFP)水平無關(guān)(P＞0.05)，而與HCC的轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），見表1。表1iNOS的表達與HCC臨床特征的關(guān)系（略） 3討論iNOS
5、表達升高在人類的多種腫瘤如乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌和胃癌等組織中普遍存在。目前研究認為，iNOS誘導(dǎo)的NO在體內(nèi)與腫瘤的作用機制存在雙重性，主要取決于NO的濃度，一方面，高濃度的NO可通過阻止腫瘤細胞中線粒體的氧化和DNA的合成發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)；腫瘤細胞中NO產(chǎn)物可誘導(dǎo)細胞凋亡，因而使腫瘤細胞的存活受到損害；另一方面，越來越多的研究認為，中、低濃度的NO有助于腫瘤的進展與轉(zhuǎn)移，NO在超氧陰離子存在的情況下轉(zhuǎn)化為過氧亞硝酸鹽，此鹽為高強度的毒性分子能夠引起DNA的破壞，因而具有潛在的致癌性〔2〕。NO還可以通過介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）促進腫瘤血管形成，與腫瘤的侵襲、生長
6、和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔3〕。這種iNOS和NO水平的改變可受患者各種因素的影響，包括化療，手術(shù)和其他與腫瘤相關(guān)的生理應(yīng)激如疼痛、脫水、缺氧、感染等〔4〕。本研究發(fā)現(xiàn)，iNOS在HCC癌組織中的表達率為61.7%，在癌旁組織和正常組織中未見表達，且其表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，表明iNOS在HCC的腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用?！緟⒖?/p>
