草莓的脫毒苗培養(yǎng).doc

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1、草莓的脫毒苗培養(yǎng)技術（1）熱處理脫毒?將草莓植株在40～41℃溫度下處理4～6周，然后取微莖尖培養(yǎng)。?（2）微莖尖脫毒?①初代培養(yǎng)?取草莓生長健壯的母株或匍匐莖上的頂芽，用自來水流水沖洗2～4h，然后剝?nèi)ネ鈱尤~片，在無菌條件下，用0.5%次氯酸鈉溶液表面消毒5min，并不停地攪動促進藥液的滲透。在無菌條件和解剖顯微鏡下剝?nèi)∏o尖分生組織，以帶有1個葉原基的莖尖為好。0.2mm的莖尖無病毒率可達到100%，但接種后的成活率下降，并延長培養(yǎng)時間。莖尖分離后，迅速接入培養(yǎng)基MS+BA0.25+NAA0.25或White+IAA0.1中。培養(yǎng)

2、條件為22～25℃，日照16～18h/d，光強3000Lx。經(jīng)2～3個月的培養(yǎng)，可生長分化出芽叢，一般每簇芽叢含20～30個小芽為適。注意在低溫和短日照下，莖尖有可能進入休眠，所以較高的溫度和充足的光照時間必須保證。?②繼代培養(yǎng)?把芽叢割成芽叢小塊，轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基中，令其長大，以利分株，待苗長大到1～2cm時，可將芽叢小塊分成單株，再轉(zhuǎn)入前述的分化培養(yǎng)基中，又會重復上述過程，達到擴大繁殖的目的。?③生根培養(yǎng)?在培養(yǎng)基中加入NAA?1mg/L或IBA?1mg/L，?使發(fā)根整齊，由于草莓地下部分生長加快，發(fā)根力較強，也可將具有兩片以上正

3、常葉的新莖從試管中取出進行試管外生根。?④馴化?用鑷子把草莓苗從試管瓶中取出，洗掉根系附帶的瓊脂培養(yǎng)基。?事先備好8×8cm或6×6cm的塑料營養(yǎng)缽，內(nèi)裝等量的腐殖土和河砂。栽前壓實，澆透水，用竹簽在缽中央打一小孔，將試管苗插入其中，壓實苗基部周圍基質(zhì)，栽后輕澆薄水，以利幼苗基部和基質(zhì)密合。?栽后的試管苗要培養(yǎng)在濕度較大的空間內(nèi)，?一般加設小拱棚保濕，并經(jīng)常澆水，以增加棚內(nèi)濕度，以見到塑料薄膜內(nèi)表面分布均勻的小水珠為宜。?約過7～10d?后。當檢查有一定的根系生出，可逐漸降低濕度和土壤含水量，進入正常幼苗的生長發(fā)育管理階段。??花藥

4、(Pollen)培養(yǎng)?花藥培養(yǎng)操作簡單，?因經(jīng)愈傷組織途徑，再分化得到的即為無病毒苗，所以可免去病毒鑒定工作。?（3）取材與培養(yǎng)?取花粉發(fā)育單核期的花蕾，置于潔凈培養(yǎng)皿中，內(nèi)放一層濾紙，滴蒸餾水數(shù)滴保濕。將處理放入3～4℃冰箱中低溫保存3～4d。經(jīng)預處理的花蕾先在70%酒精中浸泡半分鐘，取出放入新配制的飽和漂白粉上清液中消毒10min，用無菌水沖冼3次。然后在超凈工作臺上剝?nèi)』ㄋ帲⒓唇臃N?；ǚ郯l(fā)育時期可采用醋酸洋紅壓片簽定，培養(yǎng)基為MS+2.4－D?0.4?+IAA2。去分化階段培養(yǎng)條件為24～26℃，10h/d,1500Lx，2

5、0d后可產(chǎn)生乳白色的愈傷組織。?（4）植株分化?將誘導出的花藥愈傷組織轉(zhuǎn)移至1/2?MS基本培養(yǎng)基中，添加GA?0.5，BA?0.5和三十烷醇4mg/L。愈傷組織經(jīng)培養(yǎng)后很快轉(zhuǎn)綠，以后微帶淡紫紅色，?15d后在表面分化出半球形小突起，轉(zhuǎn)為綠色。20天后分化出幼葉、幼莖，并有不少突起物，以后陸續(xù)分化出新梢。???草莓無病毒苗的鑒定Identification?草莓花藥培養(yǎng)得到的為無病毒苗，?而用生長點培養(yǎng)得到的植株，則必須經(jīng)過病毒鑒定，確定其不帶病毒，才可以大量繁殖，用于生產(chǎn)。?（5）草莓病毒的種類?草莓病毒主要有四種，為斑駁病毒，皺

6、葉病毒，脈結(jié)病毒和輕型黃邊病毒。斑駁病毒在EMC指示植物上表現(xiàn)不整齊的黃色小斑點；皺葉病毒在指示植物UC—1上產(chǎn)生不整齊的小斑點，以及不整齊的葉脈，葉柄暗褐色；脈結(jié)病毒在指示植物EMC上表現(xiàn)小葉向后反轉(zhuǎn)成風車狀，尖端卷曲，葉脈成帶狀褪綠；輕型黃邊病毒在EMC指示植物產(chǎn)生紅葉，數(shù)日即枯。?（6）草莓病毒的鑒定方法?因草莓的病毒在通過汁液接種時不感染，所以通常采用小葉嫁接法來進行鑒定。?首先從被鑒定的草莓上采集長成不久的新葉，除去兩邊的小葉，中央的小葉帶1～1.5cm的葉柄，?把它削成楔形作接穗。而指示植物則除去中間的小葉，在葉柄的中央

7、用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用線把接合部位包扎好。為了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。?為保證成活，在二周內(nèi)，可罩上塑料袋，置于半見光的場所。約經(jīng)兩周時間，撤去塑料袋。若帶有病毒，嫁接后1～2個月，在新展開的葉、匍匐莖或老葉上會出現(xiàn)病癥。?草莓無病毒苗的繁殖和利用(Propagation?and?Utilization)?（7）防止蚜蟲的危害?草莓無病毒苗的繁殖重要的是要防止無病毒苗的再度污染。?由于草莓病毒主要是蚜蟲傳播的，?所以要搞好防蚜蟲工作。傳播草莓病毒的主要有草莓莖蚜、桃蚜和棉蚜。其中分布最廣泛的是草莓莖蚜，

8、莖蚜的身體著生有釘狀的毛，可以寄生在寄主的全株各個部位上。一草一木防治時可使用馬拉松乳劑，氧化樂果乳劑等接觸殺蟲劑，防治期在5～6月和9～10月，特別是9～10月一次，可防止蚜蟲的越冬。?????為保證種苗的無病毒，在原種種苗生產(chǎn)階段