植物脫毒快繁技術(shù)

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1、第五章、植物離體脫毒快繁技術(shù)一、病毒危害多數(shù)栽培植物，尤其無性繁殖植物，都易受到一種或幾種，甚至幾十種病毒的侵染。例如，草莓染60多種病毒。并且隨著培養(yǎng)時間的推移，侵染病毒的種類越來越多。植物病毒病原體可通過維管束傳導(dǎo)。因此，對無性繁殖的植物來說，一旦感染上病毒之后，就會代代相傳越趨嚴(yán)重。受病毒侵染的植物生長緩慢、畸形、產(chǎn)量大幅度下降，品質(zhì)變劣，甚至完全喪失商品價值。目前，對細(xì)菌和真菌侵染的病害，可通過藥物處理達(dá)到治愈的目的。但還沒有治病毒的特效藥。種子一般不帶病毒(豆類植物除外)，種子繁殖可得無毒植株。但對于無性繁殖植物，必須采取一些特殊

2、方法脫除病毒。脫毒快繁的一般過程1、診斷：首先了解供試材料感染病毒的種類2、莖尖培養(yǎng)脫毒或結(jié)合熱處理3、鑒定4、繁殖5、馴化移植1、熱處理脫毒原理：①病毒進(jìn)入植物細(xì)胞后，隨植物細(xì)胞DNA一起復(fù)制。熱處理并不能殺死細(xì)胞，只是鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。②熱處理是一種物理效應(yīng)，可加速植物細(xì)胞分裂，在激烈分裂的細(xì)胞中正常核蛋白合成占優(yōu)勢，使植物細(xì)胞在與病毒繁殖的競爭中取勝。因此加速分生組織細(xì)胞的分裂，能夠獲得無病毒植株。二、脫毒方法(一)熱處理脫毒依據(jù)病毒對高溫的敏感，寄主耐高溫。利用這一差異，選擇適

3、當(dāng)?shù)臏囟群吞幚頃r間，進(jìn)行高溫處理，就能使寄主體內(nèi)病毒濃度降低，傳遞速度減慢或失去活性，而寄主細(xì)胞仍然存活，并加快分裂和生長。(1)溫湯浸漬處理(2)熱空氣處理2、熱處理脫毒方法（1）溫水浸漬處理適用于休眠器官，在50℃左右的溫水中浸漬10min至數(shù)小時，方法簡便易行，但易使材料受傷。（2）熱空氣處理熱空氣處理對活躍生長的莖尖效果較好。將生長的盆栽植株移入溫?zé)嶂委熛鋬?nèi)，一般35-40℃。處理時間因植物而異，短則幾十分鐘，長可達(dá)數(shù)月。熱處理廣泛應(yīng)用于葡萄、草莓、馬鈴薯和菊花等植物。如：葡萄置于38℃可去除扇葉病毒。熱處理對葡萄扇葉病毒、草莓斑駁

4、病毒、蘋果花葉病毒等球形病毒有作用，而對另一些病毒不起作用，因此，必須與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合脫毒效果更好。植物的去病毒技術(shù)，實質(zhì)上就是采取不含病毒顆粒或病毒顆粒含量甚少的0.1～0.5mm帶1～2個葉原基的莖尖作為外植體，進(jìn)行微繁殖，使其培養(yǎng)成完整的無病毒小植株的技術(shù)。（二）莖尖培養(yǎng)脫毒1、莖尖培養(yǎng)脫毒原理病毒在植物體內(nèi)分布不均勻，其數(shù)量隨植株部位及年齡而異，越靠近莖頂端區(qū)域，病毒感染的程度越低，生長點即分生組織（約0.1-1mm）幾乎不含或含病毒很少。1、傳導(dǎo)抑制。植物體病毒的移動主要靠2條途徑：一是通過維管系統(tǒng)，而分生組織中尚未形成維管系統(tǒng)；

5、二是通過胞間連絲，但這條途徑病毒移動速度非常慢，趕不上莖尖和根尖細(xì)胞不斷分裂和活躍的生長速度。2、酶缺乏。莖尖中缺乏病毒合成所需的酶系，存在高水平內(nèi)源激素，可抑制病毒的增殖。莖尖分生組織不帶病毒，可能有4方面的原因：3、能量競爭。當(dāng)植物細(xì)胞分裂DNA復(fù)制時，病毒DNA隨著復(fù)制。因此，植物細(xì)胞分裂和病毒繁殖之間存在相互競爭。在旺盛分裂的分生組織中，代謝活動很高，正常核蛋白合成占優(yōu)勢，使病毒無法進(jìn)行復(fù)制。4、抑制因子存在。在植物體內(nèi)存在有一種“病毒鈍化系統(tǒng)”（抑制因子假說），在分生組織中的活性最高，因而使分生組織不受侵染。2、培養(yǎng)基一般以Whi

6、te、MS為基本培養(yǎng)基，提高鉀鹽和銨鹽含量有利于莖尖生長。MS培養(yǎng)某些植物莖尖時，有些離子濃度過高應(yīng)稀釋。在雙子葉植物中，激素可能在第2對葉原基中合成，所以莖尖的圓錐組織生長激素不能自給，必須加入生長素與細(xì)胞分裂素，濃度要合適。在生長素中應(yīng)避免用易促進(jìn)愈傷組織化的2，4-D，宜用NAA或IBA；細(xì)胞分裂素用KT或BA；GA3對某些植物莖尖培養(yǎng)有用。材料選擇、消毒微莖尖的剝?nèi)〗臃N3、莖尖的培養(yǎng)方法3、莖尖的培養(yǎng)方法需要一臺解剖鏡（8-40倍）。剝離莖尖要迅速并盡快接種，或在一個襯有無菌濕濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行操作，以防莖尖變干。莖尖分生組織由于有

7、彼此重疊的葉原基的嚴(yán)密保護(hù)，只要仔細(xì)解剖，(無須表面消毒)就可得到無菌的外植體。有時消毒處理會增加培養(yǎng)物的污染率。即：葉片包被嚴(yán)緊的芽，如菊花、蘭花，只須75%酒精中浸蘸一下，而葉片包被松散的芽，如香石竹、馬鈴薯等，則要用0.1%次氯酸鈉表面消毒10min。莖尖長（ｍｍ）葉原基數(shù)小植株數(shù)脫毒植株數(shù)脫毒率（％）0.1215024480.272421842.90.646400離體莖尖大小對馬鈴薯脫毒效果的影響切取莖尖越小脫毒效果越好，但太小不易成活，過大又不能保證完全除去病毒，所以莖尖大小要合適。剝?nèi)∏o尖過程:解剖鏡下用解剖針將葉片剝掉，解剖針

8、要常消毒。當(dāng)一個半圓球的頂端分生組織充分暴露出來之后，用解剖刀片將帶1-2個葉原基的分生組織切下，接到培養(yǎng)基上。???將接種的莖尖置于22℃左右溫度下。2000-3000lx1