應(yīng)用自身抗體結(jié)合多肽陣列重建早期診斷胰腺癌

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1、應(yīng)用自身抗體結(jié)合多肽陣列重建早期診斷胰腺癌贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院341000江丙贛州【摘要】目的：分析自身抗體結(jié)合多肽陣列重建在胰腺癌早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法：收集2014年1月-2015年6月我院早期胰腺癌患者40例作為觀察組研究對象，并選取同期來我院健康體檢中心體檢的健康者40例作為對照組研究對象，均進(jìn)行間接免疫熒光法檢測，并結(jié)合多肽陣列重建，分析自身抗體結(jié)合多肽陣列重建的臨床診斷價(jià)值。結(jié)果：觀察組自身抗體陽性患者25例(62.50%),多于對照組的7例(17.50%),數(shù)據(jù)差異顯著(P<0.05)。觀察組40例患者中，經(jīng)自身抗體結(jié)合多肽陣列重建診斷39例，診斷符合率為

2、97.50%。結(jié)論：自身抗體結(jié)合多肽陣列重建在胰腺癌早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值較高，建議在臨床上進(jìn)行推廣?！娟P(guān)鍵詞】自身抗體；多肽陣列重建；胰腺癌【中圖分類號】R2【文獻(xiàn)標(biāo)號】A【文章編號】9128-6509(2015)12-0007-02胰腺癌是一種病程隱匿、早期診斷率低、發(fā)展快、易惡化且預(yù)后極差的一種惡性腫瘤，對患者的身體健康危害極大，臨床主要根據(jù)影像學(xué)、病理或細(xì)胞學(xué)進(jìn)行診斷，胰腺癌早診斷中可靠的特異性血清標(biāo)志物較為缺乏［1］。木文主要分析了自身抗體結(jié)合多肽陣列重建在胰腺癌早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)作出如下總結(jié)性報(bào)告。1資料與方法1.1臨床資料收集2014年1月-2015年6月我院早期

3、胰腺癌患者40例(均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí))作為觀察組研究對象，其中男23例，女17例，最大年齡72歲，最小年齡32歲，平均(61.11±4.32)歲；并選取同期來我院健康體檢中心體檢的健康者40例作為對照組研究對象，其中男22例，女18例，最大年齡68歲，最小年齡30歲，平均(61.38±4.26)歲。兩組研究對象年齡、性別等方面根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，無明顯差異(P>；0.05),具有比較價(jià)值。1.2方法1.2.1Pepscan方法的建立設(shè)計(jì)合成p53、k-ras、和MUC1腫瘤抗原的Pepscan篩選多肽陣列。分別對P53、k-ras、和MUC1單克隆和多克隆

4、抗體進(jìn)行抗原決定簇作圖(抗體識(shí)別的抗原決定簇已知)。以建立基于多肽陣列技術(shù)的Pepscan方法。1.2.2抗原多肽篩選初步建立胰腺癌特異腫瘤相關(guān)抗原的Epitope指紋圖譜，合成p53、MUC1和k-ras腫瘤抗原的Pepscan多肽陣列。對40例滕腺癌患者進(jìn)行免疫印跡飾選，建立胰腺癌腫瘤相關(guān)抗原的Epitope指紋圖譜。1.2.3多肽陣列血清免疫印跡5%脫脂牛奶封閉后在室溫環(huán)境下靜置30分鐘。隨后將PBS稀釋的待測血清加入，在室溫環(huán)境下孵育lh。PBS-T洗10min×3次。1:5000稀釋HRP標(biāo)記兔抗人IgA+IgG+IgM(H+L)(Sigma)抗體,室溫孵育l

5、h。PBS-T洗10分鐘×3次。ECL顯色，數(shù)碼照相。1.2.4合成血清抗體檢測多肽陣列根據(jù)PeptideAAV0.3.0軟件分析檢測結(jié)果，數(shù)據(jù)進(jìn)行Geneticalgorithm/k-nearestneighbor分析，建立胰腺癌血清自身抗體的特征性線性抗原決定簇“指紋”圖譜。挑選多肽，使用SPOT技術(shù)合成胰腺癌抗體檢測多肽陣列。為提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，每個(gè)多肽都合成多個(gè)拷貝。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)資料均采用SPSS19.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料、計(jì)數(shù)資料采用均數(shù)(x±s)、百分比(％)表示，JCL分別用t、X2檢驗(yàn)，P<0.05表示存統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2

6、結(jié)果經(jīng)自身抗體結(jié)合多肽陣列重建診斷確診39例，與病理診斷結(jié)果對比,診斷符合率為97.50%。在本次研究中，觀察組自身抗體陽性患者25例，對照組自身抗體陽性患者7例，兩組數(shù)據(jù)對比差異顯著(P<0.05),詳見表1.表1兩組患者自身抗體陽性率對比3討論在世界范圍內(nèi)胰腺癌的發(fā)病率均有明顯增長趨勢，根據(jù)上海市區(qū)惡性腫瘤患病率統(tǒng)計(jì)，1995年胰腺癌男、女患病率已分別為9.6/10萬、9.2/10萬，在全身惡性腫瘤發(fā)生率中排在第7和第8位，對我國人們健康威脅極大［2］?，F(xiàn)階段，通過臨床研究可知，建立快捷、準(zhǔn)確的血清腫瘤自身抗體檢測新方法，可省略蛋白重組表達(dá)和提純等步驟來對腫瘤血清自身抗體

7、進(jìn)行檢測，和傳統(tǒng)檢測方法相比，有操作簡便、實(shí)驗(yàn)周期短ii具有標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)勢，所以在多種腫瘤抗原檢測中得以應(yīng)用及推廣［3-4］;并且在高通量檢測多種腫瘤相關(guān)抗體的表達(dá)中也適用，應(yīng)用前景較為廣闊。在研究中我們將P53、K-ras和MUC1三個(gè)胰腺癌中常見腫瘤相關(guān)抗原作為靶點(diǎn)，通過多肽陣列方法進(jìn)行抗原決定簇作圖，在進(jìn)行血清抗體檢測研究吋選擇陽性多肽組成血清抗體檢測微陣列，主要目的是為了建立篩選TAAs的抗原表位，以此來取代全長腫瘤相關(guān)抗原蛋白完成血清抗體檢測［5］。根據(jù)近年來