慢性hbv感染患者機體免疫狀況檢測分析

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1、慢性HBV感染患者機體免疫狀況檢測分析【中圖分類號】R511【文獻標識碼】A【文章編號】1672—3783(2011)12—0282—01【摘要】目的：檢測分析慢性HBV感染患者機體免疫狀況對于HBVDNA水平及HBsAg的影響。方法:選擇我院2009年2月至2011年2月90例慢性HBV感染患者，按照疾病嚴重程度，分為觀察組A(慢性重癥肝炎)、觀察組B(慢性乙型肝炎)和觀察組C(肝硬化)，各30例，分別采取ELISA試驗和流式細胞儀進行全血及血清的細胞因子白細胞介素2(IL-2)、IL10、HBV—M、淋巴

2、細胞亞群的CD4+、CD8+T細胞檢測，采取PCR試驗對HBVDNA進行檢測，觀察分析檢測的結(jié)果。結(jié)果：觀察組A和觀察組C的IL-2、IL-10、淋巴細胞亞群的CD4+、CD8+T細胞與HBsAg、HBVDNA檢測結(jié)果之間無明顯相關(P>0.05),無統(tǒng)計學意義。觀察組B的淋巴細胞亞群的IL-2、CD4+T細胞與HBVDNA之間呈現(xiàn)負相關(r=0.194,-0.566,P=0.001),具有統(tǒng)計學意義。觀察組B的IL-10、淋巴細胞亞群的CD8+T細胞與HBVDNA檢測結(jié)果之間無明顯相關(r=0.213,0.

3、323,P=0.405),無統(tǒng)計學意義。結(jié)論：慢性HBV感染患者不同疾病類型的機體免疫狀況對于HBsAg、HBVDNA有不同的影響，慢性乙型肝炎的淋巴細胞亞群的CD4+T細胞對HBsAg、HBVDNA有明顯的抑制作用?！娟P鍵詞】慢性HBV感染機體免疫狀況HBVDNA水平HBsAgHBV引起的慢性肝病其發(fā)病機制目前仍未明確,臨床上一般認為，HBV感染與機體的免疫功能變化有一定的相關性，本文通過檢測分析慢性HBV感染患者機體免疫狀況對于HBVDNA水平及HBsAg的影響，總結(jié)如下：1資料與方法1.1一般資料選擇我

4、院2009年2月至2011年2月90例慢性HBV感染患者，男51例，女39例，年齡在24~52歲，平均年齡為37.8±0.7歲，均符合2000年中華醫(yī)學會在西安會議上修訂的《病毒性肝炎防治方案》的診斷標準，按照疾病嚴重程度，分為觀察組A（慢性重癥肝炎）、觀察組B（慢性乙型肝炎）和觀察組C（肝硬化），各30例，分別采取ELISA試驗和流式細胞儀進行全血及血清的細胞因子白細胞介素2（IL-2）、IL10、HBV—M、淋巴細胞亞群的CD4+、CD8+T細胞檢測，采取PCR試驗對HBVDNA進行檢測，觀察分析檢測的結(jié)

5、果。三組患者從年齡、性別等方面對比無顯著差異(P>0.05),具有可比性。1.1儀器與試劑(1)HBV—M、IL-2、IL10檢測:采用上海實業(yè)科華生物技術有限公司提供的試劑盒，酶標儀，Wdlsean洗板機(Labsystems提供，型號：MK)；(2)CD4+、CD8+T細胞檢測：流式細胞儀(型號：EPICSXL)>軟件SYSTEMII；(3)HBVDNA檢測：采用洛陽華美生物工程公司提供的試劑盒，電泳儀(EPS300),單槽式擴增儀(型號：黑馬8000)o1.3方法1.3.1樣本采集與處理在患者上臂采集3

6、~5ml的靜脈血，在37oC下進行全血孵化20分鐘后，給予離心試驗，選擇2400r/min,離心lOmin后，分離取出上清液(血清)，保存在-20oC下備用待測。1.3.2檢測方法(1)HBV—M、IL-2、IL10檢測:進行酶聯(lián)免疫吸附實驗，即ELISA試驗，操作方法及結(jié)果判斷嚴格按試劑盒上的要求進行。(2)CD4+、CD8+T細胞檢測：校準好光路及流路，保證所有熒光信號的變異系數(shù)(CV)均V2%。異硫氧酸熒光素(FITC)為熒光I,藻紅蛋白(PE)為熒光II,藻紅蛋白-花青昔(PE-Cy5)為熒光IV,濾

7、光片的波長分別是525、575、675nm,然后對熒光陰性的范圍，即陰性對照進行確定，對PMT電壓進行校準，對顏色進行補償，對淋巴細胞的檢測進行參數(shù)測定，平均每份標本可測定細胞個數(shù)為5000個，測定出來的數(shù)據(jù)均采用流式細胞儀及SYSTEMII件進行分析。(3)HBVDNA檢測：使用聚合酶鏈反應(PCR)技術進行試驗，靈敏度在10-5Pg/ml,在進行血清HBVDNA檢測前，應先對樣品進行制備，將血清從-20°C下取出，解凍后，取出lOOPl加入到10%的10Hl的SDS及20mg/ml的蛋白酶K中，在37°C

8、下放置過夜消化后，使用酚：氯進行仿抽提兩次，再在-20°C下以無水乙醇進行沉淀，沉淀物應用20卩I的TE進行溶解。將制備好的血清樣品進行PCR試驗，每次PCR操作均設置成陰性、陽性對照試驗。在紫外燈下對擴增結(jié)果進行判讀，陽性標準為：樣品出現(xiàn)的紅橙色光帶與陽性的對照處于同一水平的位置1.4統(tǒng)計學方法本組數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行處理，組間比較采用系數(shù)r檢驗，以P：2]o本文中統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，慢性