芽孢桿菌的生防菌株篩選及其抑病機理

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1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位(畢業(yè))論文，是本人在指導教師的指導下獨立完成的研究成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標注和致謝中已作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同對本研究做出貢獻的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意，如被查有侵犯他人知識產(chǎn)權的行為，由本人承擔應有的責任。學位(畢業(yè))論文作者親筆簽名：如確日期：'咿。夕一口了一如論文使用授權的說明本人完全了解福建農(nóng)林大學有關保留、使用學位(畢業(yè))論文的規(guī)定，即學校有權送交論文的復印件，允許論文被查閱和借

2、閱；學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。保密，在年后解密可適用本授權書。不保密，本論文屬于不保密。學位(畢業(yè))論文作者親筆簽名：礱絲鉑日期：砷。小b徇峪吣＼厶C■一。指導教師親筆簽名：日期；一or，'S一福建農(nóng)林大學博士學位論文摘要本研究從感染根結線蟲的番茄根系中分離到46個細菌菌株，NA平板初篩獲得13個抑制青枯雷爾氏菌生長的拮抗菌株，其抑菌圈寬度達7．1～26．3mm，同時測得其中12個菌株對多種植物病原真菌有不同程度的抑制作用。溫室試驗表明，菌株EN5、ENl5

3、、ENOI和ENl6對青枯病的于帝病效果最為顯著，平均防效分別為70．82％、89．54％、85．38％和78．81％；而EN5、SWl和SB2能有效降低番茄根結線蟲病的根結指數(shù)，抑病效果均達49％。同時測定了這些菌株對青枯病菌一根結線蟲復合病的防治效果，結果表明，EN5、SWl和SB2能顯著降低復合病害的病情指數(shù)，其中SWl的防效最佳，青枯病指數(shù)比對照下降56．66，根結指數(shù)降低5．2l。自然土中重復測定EN5等7個菌株對青枯病和復合病害的抑病作用，其中菌株EN5、ENl6、SWl和SBl的抑病效果較為穩(wěn)

4、定。通過形態(tài)和生理生化特征初步鑒定，菌株EN5、ENl5、EN01、SBI、SB2和SWl等6個菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtills)，而ENl6為短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)；16SrDNA序列分析進一步確定菌株EN5為枯草芽孢桿菌內(nèi)生亞種(B．subtilissubsp．endophyticus)。對菌株EN5、ENl6、SWl和SBl防治番茄青枯病的作用機理進行分析，結果表明，菌株EN5處理番茄后20d，在番茄根莖部有較高定殖量(達3．60×104efu／g·FW)，

5、該菌株胞外液無抗菌活性，其抑病效果僅13．56％，菌體抑病效果則高達71．19％，因此推斷其作用機理是以菌體的定殖競爭作用為主；菌株SBl胞外液的抗菌活性相當顯著，其抑病效果達50．85％，而定殖力明顯弱于其他三個供試菌株，誘導試驗中防效較差，由此推測其抑病作用主要依賴于胞外液的抗菌活性；SWl和ENl6胞外液的抑病效果分別為22．03％和27．12％，遠低于其菌體的抑病作用，同時兩菌株具有較好的定殖力，說明抑病作用與其菌體的定殖力有關，此外，誘導抗性試驗表明兩菌株能有效地誘導番茄抗青枯病，誘發(fā)過氧化物酶(

6、POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)等抗病相關性酶活性的顯著增強，因此，誘導抗性是它們的主要抑病機制之一。以電鏡觀察法進一步分析菌株EN5在番茄根莖組織中的分布，結果顯示，EN5主要分布于主根基部及莖部的韌皮組織、細胞間隙等部位。盆栽試驗分析EN5菌株在不同土壤條件、不同接種方式及不同作物中的定殖力，結果表明，菌株EN5在自然土和滅菌土條件下均能穩(wěn)定地定殖于番茄植株；浸種、浸根和灌根處理條件下，以灌根法的定殖效果最佳；在番茄、煙草和黃瓜體內(nèi)均可定殖，其中在番茄和煙草體內(nèi)的定殖量較大。菌株

7、EN5對番茄體內(nèi)及土壤中微生物種群影響的測定結果表明，EN5處理后，植株內(nèi)3類主要微生物種群數(shù)量明顯減少，麗土壤中微生物種群在處理初期有所減少，處理后期則多數(shù)微生物群體，尤其是氨化細菌、固氮菌等生理微生物群體福建農(nóng)林大學博士學位論文2數(shù)量顯著增多，此外，ERIC．PCR結果也表明，EN5的處理還對根圍土中微生物的種類產(chǎn)生一定的影響。菌株ENl6和SWl灌根處理后2～10d內(nèi)挑戰(zhàn)接種青枯病菌，均能有效誘導番茄對青枯病的抗性，其中以間隔期為7～10d誘導效果最好，與此結果相符的是，POD、PPO和PAL的酶活力

8、在7-10d時也達到較高值。以灌根和浸種法接種菌株ENl6和SWI，灌根處理可有效誘導番茄產(chǎn)生抗病性，浸種處理誘導效果較差。盆試測定菌株SWl和ENl6對煙草花葉病毒病的誘導效果，結果表明，菌株SWl的誘導效果優(yōu)于菌株ENl6；病程相關蛋白結果進一步說明菌株SWl可以誘導煙草葉片中多種PR蛋白的大量積累，其誘導蛋白譜與乙酰水楊酸的有較大一致性，而ENl6誘導后PR蛋白積累量較小，與乙酰水楊酸的不完全相同。誘變試驗