酸菜菌種篩選用培養(yǎng)基

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1、酸菜優(yōu)良發(fā)酵菌種的篩選及應(yīng)用研究中采用的培養(yǎng)基和方法1、乳酸菌分離固體培養(yǎng)基蛋白胨lg，牛肉膏l(xiāng)g，酵母膏l(xiāng)g，葡萄糖lg，吐溫800.05%,番茄汁20%，CACO32g,溴甲酚綠0.01%，瓊脂2g。調(diào)PH值6.5，121度,滅菌15mino2、MRS培養(yǎng)基蛋白陳10g,牛肉膏10g，酵母提取物5g，K2HPO42g,擰檬酸二銨2g,乙酸鈉5g,葡萄糖20g,吐溫80lml,MgSO4.7H2O0.58g,MnSO4..4H2O0.25g,蒸餾水IL。調(diào)PH值6.2-6.4,121滅菌15min。（固體培養(yǎng)基IL培養(yǎng)基加15g瓊脂）。3、用于腸膜

2、明串珠菌的選擇性培養(yǎng)基植物蛋白胨20g，肉浸膏10g，酵母提取物6g，檸檬酸銨5g，葡萄糖10g（分別滅菌），吐溫800.5g,MgSO4.7H2O0.2g，MnSO4,4H2O0.05g，F(xiàn)eSO4.7H2O0.04g,四環(huán)素0.12ug/ml蒸餾水IL調(diào)PH值6.2-6.4，121滅菌15min。。4、M17培養(yǎng)基植質(zhì)蛋白胨5.0g，酵母提取物5.0g，聚蛋白胨5.0g，抗壞血酸0.5g，牛肉浸膏2.5g，1.0mol/LMgSO4.7H2O1ml,—甘油磷酸二鈉19g，瓊脂15g，蒸餾水IL。PH值7.15、PY基礎(chǔ)培養(yǎng)基蛋白胨0.5g，胰酶解

3、酪（Trypticase）0.5g，酵母提取物lg，鹽溶液4g，蒸館100ml水鹽溶液成分：無(wú)水CaCl20.2g,MgSO4.7H2O0.48g,K2HPO4l.Og,KH2PO4lg,NaHCO3lOg,NaC12.0g。將CaCl2和MgSO4.7H2O混合溶于300ml蒸餾水中，再加500ml水，邊攪拌邊加入其他鹽類。繼續(xù)攪拌直至全部溶解，加200ml蒸餾水，混合后貯備于4°C備用。6、PYG瓊脂培養(yǎng)基在PY基礎(chǔ)培養(yǎng)液內(nèi)加入lg葡萄糖即成為PYG培養(yǎng)基。另在上述培養(yǎng)基中加入0.1%刃天青液0.1ml和半骯氨酸一HCL.H2O0.05g,并在厭

4、氧條件下制作培養(yǎng)基。采樣一-乳酸菌分離培養(yǎng)一-優(yōu)選（根據(jù)產(chǎn)酸力）一乳酸菌鑒定（根據(jù)產(chǎn)酸是否為乳酸）一-菌種鑒定（根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定、生理生化特性鑒定、運(yùn)動(dòng)性等）一-生長(zhǎng)特性研究一優(yōu)良發(fā)酵劑的篩選（通過(guò)正交試驗(yàn)，根據(jù)產(chǎn)酸量和感官性伏兩項(xiàng)指標(biāo)綜合篩選）一-發(fā)酵試驗(yàn)一確定酸菜生產(chǎn)的最佳發(fā)酵工藝參數(shù)乳酸菌的分離取外觀無(wú)污染，味道純正的自然發(fā)酵酸菜液為分離樣，經(jīng)稀釋后于雙層乳酸菌分離固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，挑取溶。圈較大、培養(yǎng)基變黃的菌落，劃線分純。乳酸菌的優(yōu)選通過(guò)酸堿滴定法對(duì)各分離純化菌種的產(chǎn)酸量進(jìn)行定量分析，篩選出產(chǎn)酸力最強(qiáng)的菌株。產(chǎn)酸量測(cè)定采用0.1N的NaOH

5、堿液滴定法，以酚酞為指示劑，分析結(jié)果以乳酸乳酸=NNa0HXVNa0?X0.09/V樣品X100純種發(fā)酵泡菜及其風(fēng)味物質(zhì)的研究富集培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基(BCP培養(yǎng)基)：胰蛋白胨1%,牛肉浸膏0.3%，酵母提取物0.5%，NaCl0.5%，L-半胱氨酸0.04%，葡萄糖0.2%,溴甲酚藍(lán)1.6%(0.04%),調(diào)PH值7.2-7.4,121滅菌15min。種子培養(yǎng)基：牛肉膏0.5%,蛋白胨1%,酵母膏0.5%，番茄汁10%，PH值6.5發(fā)酵培養(yǎng)基：牛肉膏1%，蛋白胨1%，酵母膏1%，葡萄糖15%，吐溫800.05%PH值6.5乳酸菌富集培養(yǎng)

6、無(wú)菌吸取泡菜汁涂布于富集培養(yǎng)基，置于厭氧培養(yǎng)箱，犯"<3靜置培養(yǎng)，用作分離樣品。乳酸菌的分離、純化將富集培養(yǎng)樣品用無(wú)菌生理鹽水稀釋至合適的濃度，吸取涂布于鑒別培養(yǎng)基平板上，32°C恒溫培養(yǎng)48-72度。挑取可產(chǎn)酸（能使培養(yǎng)基由紫色變黃色）的菌落，進(jìn)行反復(fù)的分離、純化，至純菌落為止。將所獲純菌落菌株編號(hào)、保存，備用。將分離所得菌株接種發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)并檢測(cè)其PH值變化，同時(shí)對(duì)菌株進(jìn)行革蘭氏染色，篩選出產(chǎn)酸性能較優(yōu)良的菌株，保存，以備鑒定。乳酸的定性、定量實(shí)驗(yàn)1、乳酸菌菌株發(fā)酵培養(yǎng)所分離菌種在種子培養(yǎng)基中32QC培養(yǎng)12h。以4%接種景接種至盛存250m

7、l/500ml發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，于32°C靜置培養(yǎng)24h。發(fā)酵液用于乳酸定性定量分析。2、乳酸定性實(shí)驗(yàn)一紙層析法展開劑：正丁醇：甲酸：水=80:15:5。操作：用毛細(xì)管分別吸取上述發(fā)酵液，多次點(diǎn)樣于新華濾紙上，以1.5%的標(biāo)準(zhǔn)乳酸為對(duì)照，平衡2h后進(jìn)行層析，以3%的溴甲酚藍(lán)顯色，并計(jì)算、比較Rf值3、乳酸定量測(cè)定乳酸含景測(cè)定方法：取發(fā)酵液10ml加入過(guò)量CaCO3,然后加入指示劑鈣黃綠素，蒸餾水水稀釋至25ml，用0.05mol/LEDTA滴定，并以未發(fā)酵培養(yǎng)液為空白對(duì)照，計(jì)算乳酸含量。乳酸含量計(jì)算公式如下乳酸含量(%)=90.08X2X0.05

8、XVEDTa/104、發(fā)酵液酸度測(cè)定：取發(fā)酵液10ml，適當(dāng)稀釋，用0.lmol/L的NaOH滴定。以吉爾涅