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《ho1 ho2在雌性去勢大鼠陰道平滑肌中的表達(dá)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、瀘州醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。學(xué)位論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均己在學(xué)位論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：1M簽字日期：。油g年善月二日瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解瀘州醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：瀘州醫(yī)學(xué)院有權(quán)保留并向有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)瀘州醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)
2、行檢索，可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存學(xué)位論文，即：瀘州醫(yī)學(xué)院具有學(xué)位論文的數(shù)字化制品復(fù)制權(quán)，信息網(wǎng)絡(luò)傳播權(quán)和匯編權(quán)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名：飛H導(dǎo)師簽名：簽字日期：0咄年5月2日簽字日期：HO-1、HO-2在雌性去勢大鼠陰道平滑肌中的表達(dá)摘要目的：研究血紅素氧合酶一1(HO-1)、血紅素氧合酶一2(HO-2)在雌性去勢大鼠陰道平滑肌中的表達(dá)，探討雌激素對HO-1、HO一2表達(dá)的影響和HO／CO在女性性功能障礙中的作用，為進(jìn)一步探索女性性功能障礙的病理生理機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法g1．去勢雌性大鼠模型
3、的建立：24只雌性8周齡SD大鼠，實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，體重達(dá)180-2209(平均210g)，隨機(jī)分為A、B、C、D四組，每組各6只。h、B組切除大鼠雙側(cè)卵巢建立去勢雌性大鼠模型，麻醉采用腹腔注射2％戊巴比妥鈉(50mg／Kg)，取仰臥位，恥骨上1．5cm正中切口，顯露雙側(cè)卵巢后切除。C、D組(假手術(shù)組)同期在腹腔注射麻醉后只游離卵巢而不切除，然后縫合腹部切口，其余操作同手術(shù)組。2．陰道組織的切?。焊鹘M大鼠手術(shù)后在同等實驗環(huán)境下喂養(yǎng)，A、C組于術(shù)后2周切取陰道組織，B、D組于術(shù)后4周切取陰道組織。麻醉采用腹腔注射2％戊巴比妥鈉(50mg／Kg)，取仰臥位，恥骨上
4、正中切口，充分顯露卵巢及子宮，剪斷恥骨聯(lián)合，游離至宮頸及陰道，分離陰道周圍間隙，于宮頸下O．2cm和陰道末端上0．1cm切斷陰道，陰道組織分成二部分做免疫組化和RT-PCR。3．血清雌二醇測定：各只大鼠在造模前和切取標(biāo)本時用斷尾法采血放免法測定雌二醇。4．免疫組化：從形態(tài)學(xué)觀察HO一1、H0—2在A、C組陰道平滑肌中的變化。石蠟包埋，切片5pm厚：脫蠟、水化后PBS洗3次：滴加3％雙氧水，室溫靜置lOmin，PBS洗3次：將切片放入盛有抗原修復(fù)液的容器中，微波爐內(nèi)加熱至95℃，維持lOmin，室溫自然冷卻20一30min，滴加正常羊血清蛋白封閉液40ul，室溫20
5、min，甩去多余液體；滴加一抗50u1，4。C過夜，HO一1一抗為羊抗大鼠多克隆抗體(1：50)、HO一2一抗為兔抗大鼠多克隆抗體(1：50)，4。C過夜后需在37℃復(fù)溫45min；PBS洗3次；滴加二抗40u1，37℃l小時，HO-1、HO一2二抗為兔抗羊和羊抗兔多克隆抗體(1：200)；PBS洗3次；DAB顯色5～lOmin，在顯微鏡下掌握染色程度；PBS沖洗lOmin；蘇木精復(fù)染2min；PBS沖洗lOmin，室溫下自然干燥，中性塑膠封片，光鏡下觀察。5．HO-1mRNA、HO一2mRNA在陰道組織中表達(dá)的RT-PCR半定量分析：依據(jù)小量組織／細(xì)胞總RNA抽
6、提試劑盒(W6701)說明書及分子克隆實驗指南(第二版)進(jìn)行操作，在無菌工作臺內(nèi)提取陰道組織總RNA，保存于一80。C超低溫冰箱中，用Nanodrop按設(shè)備使用說明測量總RNA濃度，依常規(guī)RT-PCR步驟完成RT-PCR，電泳后用LAS-300成像儀掃描圖像，對HO一1mRNA、HO一2mRNA進(jìn)行半定量分析。結(jié)果：所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用spssll．5軟件驗證方差齊性后進(jìn)行方差分析及相關(guān)性分析。1．血清雌二醇水平測定：A、B、C、D各組造模前血清雌二醇水平組間比較無顯著差異(A：60．28±3．20；B：59．15±3．9l；C：62．4l±3．9
7、8；D：60．36±4．27pg／ml，P=O．74)；C、D組術(shù)前和術(shù)后比較無顯著差異(尸=0．69)；術(shù)后A與C、B與D組比較有顯著差異(A：29．58±3．27；C：61．50±2．48；B：29．73±3．73；D：61．29±3．05pg／ml，P=O．001)；術(shù)后A、B組間比較P=-O．805，F(xiàn)>O．05。2．免疫組化：HO-1、HO-2在陰道平滑肌中均有表達(dá)，A組表達(dá)要低于C組。3．RT—PCR：以GAPDH為內(nèi)參比較HO-1mRNA的OD值A(chǔ)組(0．69730±0．00442)、B組(O．69567±0．04265)分別低于C組(O．80900
8、±0．18
