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《jnk信號(hào)通路在二甲基胂酸所致人胚肺成纖維細(xì)胞dna損傷和凋亡中的作》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文題邀焦墨鎏整查丕里塞盟墮盟鍪冬墅韭盛塹箜塑整壁照筮塑簍塑燙室史煎笠曼．是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。其他同志對(duì)本研究的啟發(fā)和所斂的貢獻(xiàn)均在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。專(zhuān)監(jiān)：一者簽名：焯霹期：觸礎(chǔ)論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。
2、作者簽名：多年導(dǎo)師簽名：』咀數(shù)霹期：齜鬻窳囂科大學(xué)碩士攀彼論文斟K僖號(hào)通路在二甲基囂棗酸所致人胚萎奉成纖維細(xì)臆DNA損傷和凋亡中的作用南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，南京210029研究生尹仕偉指導(dǎo)教師劉起展教授指導(dǎo)小組周建偉教授李患截教授李?lèi)?ài)萍助理研究員中文摘要砷是人類(lèi)確定(I類(lèi))致癌物，通過(guò)食用含有無(wú)機(jī)砷化物的水和食物所季
3、起的砷中毒在全世界廣泛存在。另外一方萄，砷還是多種腫瘤有效化學(xué)治療藥物，因此，環(huán)境和醫(yī)源性接觸砷化物的機(jī)會(huì)大大增加。二甲基胂酸(DMA)是無(wú)機(jī)砷在人體肉的主要的甲基化代謝產(chǎn)物，其本身也廣泛用作殺蟲(chóng)劑。傳統(tǒng)的觀念一直認(rèn)為砷在體內(nèi)的甲基化過(guò)程是一個(gè)解毒促排泄過(guò)程
4、，但是最近有研究表明D凇可警l起細(xì)胞DNA斷裂，DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)和細(xì)胞凋亡，認(rèn)為DMA具有遺傳毒性和致癌性。最近越來(lái)越多的研究表碉砷的甲基化過(guò)程可能冪僅僅是含解毒機(jī)制，砷在體內(nèi)的甲基化過(guò)程可能在砷致癌過(guò)程審發(fā)揮重要作用。罄前關(guān)于砷甲基化代謝產(chǎn)物在體外毒襤機(jī)制的研究較少，DMA損．傷細(xì)胞的機(jī)制還不太清楚，其中關(guān)于信號(hào)通路在其中的2鬻索醫(yī)零萼大學(xué)碩士攀僚論文作用的研究比較少。c-Jurt氨基朱端激酶(JNK)信號(hào)通路是絲裂原激活蛋白激酶(MAPK》家族信號(hào)通路的重要囊通路之一，，其參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化與凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)孫派信號(hào)通路在無(wú)機(jī)砷及其他合物鼴致細(xì)胞損傷中發(fā)揮一定作用。
5、霾詫?zhuān)U明DMA所致細(xì)胞損傷及英分子機(jī)制對(duì)于探討砷致癌分子機(jī)制及砷中毒的防治具有重要意義。本課題擬探討不溺濃度D淞對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞(HELF)N殖、DNA損傷、細(xì)胞周期和凋亡及nⅨ信號(hào)通路的影響；并應(yīng)用撲K抑制荊和反義抑制技術(shù)構(gòu)建撲Ⅸ缺陷HELF．細(xì)胞，以阻斷心x信號(hào)通路來(lái)深入探討羚淤信號(hào)通路在DMA所致胍LF細(xì)胞DNA損傷和凋亡中的作用，為進(jìn)一步揭示DMA所致細(xì)胞損傷的分子機(jī)制，全面了解砷的致癌分子機(jī)制和砷化物對(duì)機(jī)體的影響提供一定的科學(xué)依據(jù)。方法一、DMA對(duì)HELF細(xì)胞增殖的影響用0．0、2．5、5．0、10。0、20．0grnol／LDMA分別處理HELF細(xì)胞12、24
6、、48h，用MTT法和CCK．8法檢測(cè)HELF細(xì)胞相對(duì)增殖率，尋找其所致HELF細(xì)胞增殖蜷劑量。效應(yīng)和時(shí)間．效應(yīng)關(guān)系。二、DMA對(duì)HELF細(xì)胞DNA損傷的影響用0．0、2．5、5．0、10．0、20．0gmol／LDMA分別處理HELF細(xì)胞12、24、48h，收集HELF細(xì)胞蛋白，用Westernblot檢測(cè)HELF細(xì)胞v．H2AX蛋白表達(dá)水平，并用鼠一張膜上相應(yīng)泳道的[3-actin條帶的灰度進(jìn)行校正?；h京醫(yī)秘大學(xué)碩士學(xué)位論文三、DMA對(duì)HELF細(xì)胞周期的影響用0．0、2．5、5．0、10．0、20．0獅aaol／LDMA分別處理I／ELF細(xì)胞48h或用20．0tamol幾
7、DMA分別處理HELF細(xì)胞12、24、48h，收集細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。四、DMA對(duì)HELF細(xì)胞凋亡的影響周0．0、2．5、5．0、10．0、20．0pmol／LDMA分別處理HELF細(xì)胞12、24、48h，分別用Hoechst33258法檢測(cè)HELF細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化及細(xì)胞凋亡率和用Westernblot檢測(cè)HELF細(xì)胞斷裂Caspase3蛋白表達(dá)水平，尋找其劑量．效應(yīng)乖時(shí)間一效應(yīng)關(guān)系。五、DMA對(duì)HELF細(xì)胞磷酸化J-NK表達(dá)水平的影響用0．0、2．5、5．0、10．0、20．0}tmol／LDMA分別處理HELF細(xì)胞12、24、48h，收集HELF細(xì)胞蛋
8、白，用Westernblot檢測(cè)HELF細(xì)胞JNK、和磷酸化JNK蛋白表達(dá)水平，并用同一張膜上相應(yīng)泳道的[3-actin條帶的灰度進(jìn)行校正。六、J-NK缺陷I-IELF細(xì)胞株建立從HELF細(xì)胞中抽提總RNA，用RT-PCR法擴(kuò)增霹的DNA片段，經(jīng)重組技術(shù)構(gòu)建JNK基因反義RNA綠色熒光真核表達(dá)質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染I／ELF細(xì)胞，經(jīng)G418篩選后，用Westernblot檢測(cè)JNK蛋白含量，確認(rèn)獲得JNK缺陷HELF細(xì)胞株。七、抑制JNK對(duì)DMA所致細(xì)胞DNA損傷與凋亡的影響預(yù)先用20．0pxnol／LJ
