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1、氮磷等營養(yǎng)鹽對尖刺擬菱形藻生長的影響呂頌輝1,陳翰林1,何智強21.暨南大學水生生物研究所,廣東廣州510632;2.暨南大學生物工程學系,廣東廣州510632摘要:尖刺擬菱形藻Pseudo-nitzschiapungensHalse是我國沿海常見的赤潮生物。通過對采集和分離于珠江口大亞灣海域的尖刺擬菱形藻藻種,在實驗室條件下,研究不同濃度氮、磷等營養(yǎng)鹽限制下該藻生長增殖的關系和特征,以及氮磷比(c(N)/c(P))變化等對該藻生長的影響。實驗結果表明:尖刺擬菱形藻對氮、磷的依賴性較強,隨濃度的變化而變化,屬于營養(yǎng)依賴型藻類。實驗進一步發(fā)現(xiàn),尖刺擬菱
2、形藻的生長對氮、磷的需求并不是越多越好,而要求有一定的比例范圍,得出c(N)/c(P)在10~32范圍內(nèi)有相對較大的生長,而當c(N)/c(P)<5或c(N)/c(P)>100時,尖刺擬菱形藻的生長明顯受到抑制。關鍵詞:尖刺擬菱形藻;氮;磷;氮磷比中圖分類號:Q178.1+12文獻標識碼:A文章編號:1672-2175(2006)04-0697-05尖刺擬菱形藻Pseudo-nitzschiapungens是一種常見的海洋硅藻,也是形成有害赤潮的主要藻種之一。在20世紀80年代以前,一般都認為硅藻赤潮并不產(chǎn)生毒素,只是角毛藻中的某些種類會對養(yǎng)殖魚類造
3、成物理性的損傷,導致魚類死亡。真正對硅藻特別是擬菱形藻的重視開始于1987年,這一年在加拿大的愛德華王子島(PrinceEdwardIsland)發(fā)生一起由于食用當?shù)睾S蚺囵B(yǎng)的貽貝Mytilusedulis而引起的中毒事件,造成3人死亡,100多人中毒。經(jīng)研究,引起中毒的物質(zhì)是神經(jīng)毒素-多莫酸(DomoicAcid,DA),它是由多列擬菱形藻Pseudo-nitzschiamultiseries產(chǎn)生的[1]。由DA引起的貝類毒素稱為記憶缺失性貝毒(AmnesicShellfishPoisoning,ASP),癥狀包括:嘔吐、腹瀉、神智不清、喪失記憶等
4、,最嚴重者可導致死亡。這次事件以后,世界的其它地區(qū)又陸續(xù)報道人類或其它動物的DA中毒事件,事件的元兇均是擬菱形藻屬的種類。尖刺擬菱形藻是中國沿海普遍存在的浮游生物種類,并且也是重要的赤潮生物種類,在大連、膠州灣、長江口、廈門港及南海各港灣都引起過赤潮[2-3]。據(jù)報道,我國的南海海域夏季硅藻類約占75.7%,冬季硅藻類約占95.8%,主要優(yōu)勢種類為伏氏海毛藻、尖刺擬菱形藻、柔弱擬菱形藻等[4]。而目前國內(nèi)對于尖刺擬菱形藻的研究主要以自然生態(tài)特征和分類學研究為主,營養(yǎng)生理方面的研究較少,所以加強對尖刺擬菱形藻的營養(yǎng)因子研究,研究有關生態(tài)因子對它們增殖的
5、影響,對于了解赤潮發(fā)生機理具有重要意義,對研究我國南海海域赤潮的發(fā)生具有指導作用。1材料與方法1.1藻種與培養(yǎng)基實驗用藻種尖刺擬菱形藻Pseudo-nitzschiapungens分離自廣東大亞灣,經(jīng)純化后培養(yǎng)于暨南大學藻種室。實驗前將處于對數(shù)生長期的實驗藻種離心,用不添加任何培養(yǎng)基的人工海水清洗3次,然后在人工海水中饑餓培養(yǎng)2d,以此作為實驗藻種用于實驗種源。實驗用f/2培養(yǎng)基進行培養(yǎng),其中的N、P濃度按實驗要求添加。1.2培養(yǎng)條件采用100mL錐形燒瓶置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。溫度(20±1)℃,光照度(日光燈)約4000lx,光暗比L∶D為12
6、h∶12h。藻種培養(yǎng)用人工海水配置的f/2加富培養(yǎng)液,實驗用人工海水按照Harrison配方配制(鹽度為28‰)[5]。1.3器皿處理與儀器為減少其他元素對實驗的干擾,所用玻璃器皿均在w=5%稀HCl中浸泡過夜,用雙蒸水沖洗干凈后備用。培養(yǎng)用三角瓶在做上述處理后,雙蒸水清洗,最后在160℃下干熱滅菌。恒溫光照培養(yǎng)箱(LRH-400-GⅡ),照度儀(LocorModelLI185meter,2πcollector),顯微鏡(OlympusCH30),電子天平(SartoriusBS210S),計數(shù)框等。1.4實驗設置在人工海水中加入除N、P之外的所有f
7、/2培養(yǎng)基的其他成分,然后根據(jù)赤潮高發(fā)區(qū)N、P濃度的平均值,設置P(NaH2PO4·2H2O)濃度為0.65μmol·L-1,各N源濃度按設定濃度添加;設置N(NaNO3)濃度為40.0μmol·L-1,各P源濃度按設定濃度添加。實驗用f/2培養(yǎng)基用人工海水配制,鹽度為28‰,其中分別以NaNO3和NaH2PO4作為N源和磷源,其濃度按下表的梯度分別配制(表1)。1.5生長曲線的測定在顯微鏡下用計數(shù)框隔天計數(shù),每瓶計數(shù)2次,取平均值,記錄20d左右,以時間為橫坐標,每1mL液體中的細胞數(shù)為縱坐標,繪制生長曲線。1.6生長率曲線按照公式生長率u=(l
8、nN2-lnN1)/(t2-t1)計算,其中t1、t2為培養(yǎng)時間;N2和N1分別為培養(yǎng)t2和t1時間的細胞密