資源描述：
《基于耐輻射球菌的生物傳感器的構(gòu)建以及耐輻射球菌drasnf2基因的分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要基于對極端抗輻射細(xì)菌——耐輻射球菌(DeinococcusradioduransR1)的遺傳改造，我绱禱建了一個(gè)窶時(shí)壘細(xì)脆生物傳感器來檢測高放射性環(huán)境中的放射性物質(zhì)和遺傳毒物。該系統(tǒng)璦可受DNA損傷誘導(dǎo)調(diào)控翡關(guān)鍵基溜——孵鰣蒸霾翡巖動予柞感受謬子，議加強(qiáng)型綠色熒光蛋巍(eGFP)作報(bào)告因子，制髑大腸桿菌鴦對輻射球餐昀穿梭質(zhì)粒俸載體導(dǎo)入到宿主蓄醛輻射球菌獲得了生輳傳感器菌株DRG300。該菌株可以在recA基鑫啟動子的萼l(xiāng)發(fā)下表達(dá)eGFP蛋白，從褥在488nm紫外線激發(fā)下發(fā)出綠色熒光．?dāng)z據(jù)耐輻射球菌活細(xì)胞中熒光強(qiáng)度和eGFP蛋白表達(dá)量之間的相關(guān)性，我們發(fā)現(xiàn)在D
2、RG300菌株中熒光強(qiáng)度潮DNA損飭霹予魄如￥射線和墼裂霉索C(MMC)之閽，在一定范圍之內(nèi)存在很顯著的裁量正相關(guān)性．葡過去一些文獻(xiàn)中報(bào)道昀金細(xì)胞傳感器相鈀，我們所構(gòu)建的這個(gè)重組菌株璃對具有廣闞的劑量探測范匿和較高的靈敏度．研究結(jié)果表明，DRG300可律為一個(gè)潛在全細(xì)胞生物傳感器，基予詫拘建昀檢測系統(tǒng)，可駁髑來實(shí)越鑒測環(huán)境孛敖射性和毒性污染物所造成的生物學(xué)危害。全基因組測序發(fā)現(xiàn)耐輻射球菌中存在大量的未知基因，而借于基因芯片和蛋白質(zhì)組學(xué)昀研究表嘮煮部分功能未知基因?qū)﹄婋x輻射脅迫蠢類似＆跬酶表達(dá)譜恧表達(dá)量既ReeA燕大，這為尋找recA基西之外的DNA損傷感應(yīng)園子提
3、供可能．基于此類DNA損傷修復(fù)穗關(guān)基因進(jìn)行構(gòu)建全細(xì)胞生物傳感器檢測環(huán)境中昀DNA損傷因子，并基于新的熒光報(bào)告基露系筑，探索功整未知基因昀表達(dá)特性，我{}】耨建了基于ddrA秘ddrB基囂啟動予PddrA葶韉PddrB的金細(xì)胞生物傳感器。通過將廖動子PddrA靜PddrB分別穗pRADZ3演粒融合后，轉(zhuǎn)化入耐輻射球菌Rl菌株。劑用一種基于8．半乳糖苷酶酶活測定耦聯(lián)熒光素酶活性，構(gòu)建一種有較高靈敏度和穩(wěn)定性，檢測手段曼是便捷的全細(xì)脆感受器梭測系統(tǒng)。并通過毫離輻射和MMC下檢測菌株的發(fā)光特性，揭示了ddrA和ddrB在表達(dá)方式上同recA差異的證據(jù)．贊對耐輻射球菌鐫S
4、nf2家族殘員DraSNF2，我翻遵過測序，確認(rèn)了DRl258和DRl259組成了一個(gè)完整的ORF，編碼一個(gè)Snf2家族蛋鴦。裁們分析了此蛋盤的保守結(jié)構(gòu)域，發(fā)現(xiàn)去除內(nèi)含肽的DraSNF2剛Snf2家族中的SS01653貶家族成員靄很高的同潦性，黌與Snf2箕毽亞家族蛋蠹甓顯隰離開寒。通過與SS01653藍(lán)家族成員皆巴知結(jié)橇蛋巍鰉對比，預(yù)測了其可能具有的生化特性和生物學(xué)功能。通過基因敲除突變，構(gòu)建了draSNF2基因的Vl突變株，經(jīng)過DNA損傷實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)draSNF2對耐輻射球菌的極端抗輻射特性并不是必需的。VllAbstractBasedonagenetical
5、lymodifiedradioresistantbacteriaDeinococcusradiodurans，weconstructedarealtimewholecellbiosensortomonitorradioactivityandgenotoxicityinhi曲Iyradioactiveenvironment。Theerahancedgreenfluorescenceprotein(eGFP)wasfusedtothepromoterofacrucialDNAdamage—induciblerecAgenefrom／9．radiodurans，and
6、theconsequentDNAfragment(PrecA-eg茲o)carriedbyplasmidwasintroducedintonradioduransR1straintoobtainthebiosensorstrainDRG300．ThisengineeredstrainCallexpresseGFPproteinandgeneratefluorescenceininductionoftherecAgenepromoter．Basedonthecorrelationbetweenfluorescenceintensityandproteinexpre
7、ssionlevelinliveD：radioduranscells，wediscoveredthatthefluorescenceinductionofstrainDRG300respondsinaremarkabledose-dependentmannerwhentreated誠m轉(zhuǎn)NAdamagesourcessuchasgammaradiationandmitomycinC。Itisencouragingtofindthewidelydetectiverangeandhi曲sensitivityofthisreconstructedstraincompa
8、ring、蕊也other
