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1、轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的研究進(jìn)展摘要:綜述了轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的研究進(jìn)展,包括抗蟲基因的研究、載體構(gòu)建技術(shù)的研究、轉(zhuǎn)化技術(shù)的研究及存在的問題等,并展望了轉(zhuǎn)基因抗蟲棉未來發(fā)展前景。關(guān)鍵詞:轉(zhuǎn)基因抗蟲棉花研究進(jìn)展引言棉花生長周期長、蟲害多,造成的損失非常嚴(yán)重。據(jù)統(tǒng)計(jì),在轉(zhuǎn)基因抗蟲棉商品化之前,全球每年用于防治棉花蟲害的費(fèi)用高達(dá)20億美元,約占所有農(nóng)作物防蟲費(fèi)用的四分之一。[1]傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥防治棉鈴蟲不僅費(fèi)用高,且已引發(fā)了棉蟲的抗藥性,同時(shí)化學(xué)殺蟲劑的過量使用也帶來了環(huán)境污染的問題,而轉(zhuǎn)基因植物所產(chǎn)生的殺蟲蛋白主要是通過抑制害蟲消化等生理功能而達(dá)到抗蟲的目的。與
2、施藥防治棉田害蟲相比,轉(zhuǎn)基因技術(shù)具有較多優(yōu)勢:不會在土壤和地下水中造成殘留;不會被雨水沖刷流失;對非靶標(biāo)生物無毒性;保護(hù)作用無盲區(qū);減少農(nóng)藥及用工投入[2]等。雪花凝集素(Gulanthusnivalisagglutiningene,GNA)是第一個(gè)轉(zhuǎn)入重要作物、并對刺吸式口器害蟲有抗性的基因,轉(zhuǎn)GNA的水稻可降低害蟲的存活率,阻止害蟲的發(fā)育[3]。另外煙草陰離子過氧化物酶[4]、昆蟲幾丁質(zhì)酶基因[5]也被用于抗蟲基因工程的研究。迄今為止在棉花抗蟲基因工程研究領(lǐng)域,最成功的例子是蘇云金芽孢桿菌Bt殺蟲基因的應(yīng)用,其次是蛋白酶抑制劑基因。另外,
3、凝集素、α-淀粉酶抑制劑、膽固醇氧化酶等轉(zhuǎn)基因抗蟲植物的研究也取得了進(jìn)展,所以利用基因工程技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉受到了各國的高度重視。自1996年商品化種植轉(zhuǎn)基因作物開始,全球轉(zhuǎn)基因植物的種植面積已由1996年的170萬hm2猛增到2008年的1.25億hm2,增長了73倍,2008年全球市場價(jià)值已達(dá)75億美元,約占全球商業(yè)種子市場的22%,其市場價(jià)值優(yōu)勢明顯,轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)得到了蓬勃發(fā)展,尤其在發(fā)展中國家。印度Bt棉2002年引入,連年種植面積快速增加,至2008年達(dá)760萬hm2,產(chǎn)量翻番,曾經(jīng)是全球棉花產(chǎn)量很低的國家,現(xiàn)已成為棉花出口國。轉(zhuǎn)基
4、因棉回報(bào)率高,生產(chǎn)成本低,市場需求大,到2005年我國通過國家審定的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉品種已增至26個(gè)[6],到2007年我國轉(zhuǎn)基因抗蟲棉種植面積已達(dá)380萬hm2,占全國棉花種植面積的69%。農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用國際服務(wù)組織(ISAAA)發(fā)布的報(bào)告顯示,2007年轉(zhuǎn)基因作物種植面積增加了12%,達(dá)到了1.143億hm2,成為過去五年來種植面積增加第二快的一年。[7]2008年至2010年,我國新型轉(zhuǎn)基因抗蟲棉培育和產(chǎn)業(yè)化全面推進(jìn),新培育36個(gè)抗蟲棉品種,累計(jì)推廣1.67億畝,實(shí)現(xiàn)效益160億元,國產(chǎn)抗蟲棉市場份額達(dá)到93%,有效控制了棉鈴蟲危害,徹底
5、打破了國外抗蟲棉的壟斷地位。這是我國轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)取得的成就之一。我國轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究與應(yīng)用取得了顯著成效:獲得一批具有重要應(yīng)用價(jià)值和自主知識產(chǎn)權(quán)的基因,培育一批抗病蟲、抗逆、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高效的重大轉(zhuǎn)基因生物新品種,為我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供強(qiáng)有力的科技支撐。然而,隨著轉(zhuǎn)基因抗蟲棉在世界范圍的發(fā)展,也不斷涌現(xiàn)出一些問題,如棉花質(zhì)量問題,抗蟲性持久問題,對生態(tài)環(huán)境安全問題等,本文綜述了轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的研究進(jìn)展,包括抗蟲基因的研究、載體構(gòu)建技術(shù)的研究、轉(zhuǎn)化技術(shù)的研究及存在的問題等,并展望了轉(zhuǎn)基因抗蟲棉未來發(fā)展前景。1.幾種抗蟲基因的介紹1
6、.1Bt基因Bt基因是蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)的簡稱,它是一種革蘭氏陽性菌,在地球上分布十分廣泛。Bt基因是抗蟲棉中研究最多、進(jìn)展最快、應(yīng)用最廣泛的一類基因,它對鱗翅目昆蟲有專一殺傷作用。大部分Bt殺蟲蛋白具有殺蟲專一性和高度選擇性,所以對植物和包括人在內(nèi)的動物沒有毒害,而且是環(huán)境可以接受的。這種芽孢桿菌的殺蟲特性在于它在形成芽孢時(shí)產(chǎn)生一種殺蟲晶體蛋白(insecticidalcrystalprotein,ICP)或(δ-內(nèi)毒素)[8,9]轉(zhuǎn)Bt基因棉的毒素能在棉株內(nèi)持續(xù)表達(dá),使得棉鈴蟲在棉花的整個(gè)生長期都
7、受到Bt毒蛋白的高壓選擇,因而減少了農(nóng)藥用量約60%,減少勞動力投入7%,轉(zhuǎn)基因抗蟲棉花比一般棉花平均提高單產(chǎn)10%,扣除種子成本和價(jià)格因素,每公頃增收可達(dá)到1250元[10]Bt基因的種類很多,但獲得轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的Bt基因僅有Cry1A(b)、Cry1A(c)、Cry1A等少數(shù)幾種。Bt基因?qū)γ掴徬x、紅鈴蟲、玉米螟等害蟲有較高的抗性。[7]天然Bt基因在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)很低[Vaecketal.1987,F(xiàn)ischhoffetal.1987],故多采用人工合成的方法對Bt基因進(jìn)行改造以獲得能在植物高校表達(dá)的殺蟲基因。如:Perlak等[13
8、]按照雙子葉植物優(yōu)化密碼子,以化學(xué)合成方法合成了衍生于BtkurstakiHD-1、Cry1A(b)和HD-73、Cry1A(c)的嵌合基因,其3′端的1/2序列被