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1、微生物論文微生物論文微生物及其代謝物快速檢測(cè)技術(shù)的研究摘要我們的日常生活與食品微生物密切相關(guān)，例如食品發(fā)酵、食品腐敗、食品中毒屬三個(gè)類群的微生物。食品微生物在許多食品的上產(chǎn)中起著至關(guān)重要的作用，其中細(xì)菌和真菌是導(dǎo)致食品腐敗變質(zhì)的主要元兇，食品中微生物的檢測(cè)技術(shù)和自動(dòng)化的發(fā)展，時(shí)刻影響著我們的生活。10微生物論文食品微生物檢測(cè)技術(shù)很多，比較傳統(tǒng)的方法是依靠培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)、分離及生化鑒定。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和科研水平的不斷日高，微生物的快速檢測(cè)技術(shù)越來(lái)越受到眾多科研人員的青睞，成為科研的熱點(diǎn)。關(guān)鍵詞：食品安全;微生物;快速檢測(cè)
2、技術(shù)微生物快速檢測(cè)法的國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀微生物快速檢測(cè)技術(shù)在在國(guó)內(nèi)外成為愈來(lái)愈熱的話題好人研究課題，目前國(guó)內(nèi)外的快速檢測(cè)方法主要有以下幾種。1.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCRPCR技術(shù)是由Kleppe[3]等人在1971年首先提出的。該方法通過(guò)對(duì)人工難以培養(yǎng)的微生物相應(yīng)DNA片段的擴(kuò)增，檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物含量，從而快速地對(duì)食品中致病菌含量進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)，首先在高溫下(95℃)使得蛋白質(zhì)變性，DNA雙鏈變成單鏈；再迅速降溫(55℃)，每條DNA單鏈退火，這就是所謂的熱循環(huán)。之后溫度重新上升到95℃，開始新的循環(huán)。經(jīng)一套擴(kuò)增循環(huán)(21到731次
3、)將一個(gè)單分子DNA擴(kuò)增到10分子。整個(gè)過(guò)程可以在1h內(nèi)通過(guò)自動(dòng)熱量循環(huán)器完成。理論上，只要樣品中含有一分子沙門氏菌的DNA，通過(guò)PCR技術(shù)完全可以在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)到。這種測(cè)定方法的優(yōu)點(diǎn)是測(cè)定結(jié)果迅速，靈敏度和特異性高，檢測(cè)成本低。2.酶聯(lián)免疫法ELISA抗原—抗體反應(yīng)法是測(cè)定特異性致病菌及其產(chǎn)生毒素最常用的方法。ELISA是利用抗原和抗體之間的反應(yīng)，在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的許多方面都有應(yīng)用?？贵w在抗血清中可以是單克隆抗體，也可以是多克隆抗體。這兩種抗體在ELISA技術(shù)中對(duì)于沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、李斯特菌等血清型細(xì)菌有很
4、好的檢測(cè)效果。檢測(cè)時(shí)首先將抗體吸附到固體載體上，然后再加富集培養(yǎng)物，使抗體將樣品中所有目的抗原結(jié)合到固體載體上。實(shí)際中常使用一種夾心模式，在該模式中，先將第二個(gè)酶標(biāo)抗體加入樣品中，然后加入一種能與第二個(gè)酶標(biāo)抗體發(fā)生陽(yáng)性顏色反應(yīng)的反應(yīng)底物。如果樣品中沒有目的抗原，酶標(biāo)抗體就無(wú)法結(jié)合，也就不會(huì)發(fā)生顏色反應(yīng)，反之就可以認(rèn)為該樣品呈陽(yáng)性。3.直接表面熒光濾膜計(jì)數(shù)技術(shù)(DEFT)10微生物論文這是一種能迅速且直接測(cè)定樣品中微生物負(fù)荷量的生物化學(xué)檢測(cè)法。最初英國(guó)科學(xué)家是為了對(duì)牛奶樣品進(jìn)行檢測(cè)而開發(fā)設(shè)計(jì)，目前該方法已經(jīng)應(yīng)用到乳制品、肉類
5、制品、飲料、水和污水等物質(zhì)的檢測(cè)中。該項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)需要使用膜過(guò)濾技術(shù)和表面熒光顯微鏡，將樣品進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)后，利用DEFT計(jì)數(shù)。該項(xiàng)技術(shù)能在24h內(nèi)預(yù)測(cè)5℃和11℃下保存的巴氏殺菌乳的質(zhì)量是否一致。每個(gè)樣品的檢測(cè)時(shí)間約25min，費(fèi)用較低。4.生物感應(yīng)器biosensor生物感應(yīng)器，既可以辨認(rèn)一個(gè)分子的信號(hào)，也可以辨認(rèn)大量分子的信號(hào)。整個(gè)細(xì)胞都可以用作生物感應(yīng)器。在應(yīng)用微生物領(lǐng)域游樂廣闊的發(fā)展前景，檢測(cè)對(duì)象包括毒素(葡萄球菌腸毒素、海豚毒素、貝類毒素等)、特定的致病菌(例如沙門氏菌、葡萄球菌、大腸桿菌157:H7等)。其基本原理
6、雖簡(jiǎn)單，但在實(shí)際應(yīng)用中需要許多儀器共同完成。近幾年來(lái)，人們普遍較為關(guān)注“生物芯片”和“微芯片”在食源性致病菌等微生物的檢測(cè)。在設(shè)計(jì)生物芯片時(shí)，可以在芯片上加上不同種類的抗體或者DNA分子，以便在同一個(gè)芯片上同時(shí)完成對(duì)沙門氏菌、李斯特菌、大腸桿菌、葡萄球菌等的檢測(cè)。據(jù)Heron報(bào)道(2000年)，生物芯片在本世紀(jì)中葉會(huì)有舉足輕重的作用，其市場(chǎng)價(jià)值可達(dá)50億美元之高[3]。新型快速檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展與研究1.金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌生物學(xué)特征金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬的一種，屬于革蘭氏陽(yáng)性菌。直徑為0.8~1.5μm，金黃色葡
7、萄球菌無(wú)鞭毛、芽胞，少部分有莢膜，不能運(yùn)動(dòng)。為需氧或兼性厭氧菌。最適宜的生長(zhǎng)溫度為37℃，PH值為7.4。金黃色葡萄球菌具有高度的耐鹽性，在高鹽培養(yǎng)基中可以良好的生長(zhǎng)。金黃色葡萄球菌還可以分解乳糖、麥芽糖、蔗糖、核糖、松二糖、甘露糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。其可以分解甘露醇，還可以產(chǎn)生溶血物質(zhì)，因此在血平板上培養(yǎng)會(huì)產(chǎn)生溶血環(huán)。其產(chǎn)生的血漿凝固酶可以使血漿產(chǎn)生凝固，這也是金黃色葡萄球菌區(qū)別于其他葡萄球菌的的主要性質(zhì)。還可以還原硝酸鹽，產(chǎn)生脂酶和卵磷脂酶，因此在Baird-Parker培養(yǎng)基上培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌可以在菌落周圍產(chǎn)生沉淀環(huán)和透
8、明圈。金黃色葡萄球菌在一般的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)中就可以良好的生長(zhǎng)，但是只有當(dāng)生長(zhǎng)條件如營(yíng)養(yǎng)成分、溫度、水分活度、pH等條件適宜的情況下才會(huì)產(chǎn)生腸毒素，而腸毒素的產(chǎn)生是導(dǎo)致食物中毒的原因。金黃色葡萄球菌抵抗外屆不良環(huán)境的能力很強(qiáng)，在80℃條件下加熱達(dá)到10微生物論文30min才能使其死亡。金黃色葡萄球菌的致病性金黃
