畢業(yè)論文正文規(guī)范

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1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))第16頁(yè)引言青貯是利用微生物的發(fā)酵作用，長(zhǎng)期保存青綠多汁飼料營(yíng)養(yǎng)特性，擴(kuò)大飼料來(lái)源的一種簡(jiǎn)單、可靠而經(jīng)濟(jì)的方法，是保證家畜常年均衡供應(yīng)青綠多汁飼料，調(diào)劑淡季青飼料豐欠，合理利用青飼料的一項(xiàng)有效方法。優(yōu)質(zhì)的青貯飼料色澤黃綠且有光澤，氣味酸香、柔軟多汁，是家畜越冬度春不可缺少的優(yōu)良飼源。青貯飼料不添加任何動(dòng)物源添加劑，具有安全可靠、生產(chǎn)條件便利等特殊優(yōu)點(diǎn)。青貯飼料在微生物發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸、醋酸及醇類(lèi)具有酒香味，所以它適口性好，且易消化吸收。從青貯的發(fā)酵機(jī)理分析[10]，青貯飼料發(fā)酵過(guò)程是乳酸菌及多種微生物大

2、量繁殖的過(guò)程。如何使其更快地產(chǎn)生乳酸及揮發(fā)性脂肪酸（VFA），促進(jìn)多糖與粗纖維的轉(zhuǎn)化，抑制丁酸的產(chǎn)生，有效提高青貯飼料的品質(zhì)，是近30年來(lái)世界上青貯技術(shù)研究的熱點(diǎn)。青貯的全過(guò)程就是復(fù)雜的微生物發(fā)酵和生物化學(xué)反應(yīng)的過(guò)程，是各類(lèi)微生物興衰變化的結(jié)果。參與作用的微生物很多，但以乳酸菌為主，青貯飼料調(diào)制的成敗，主要決定于乳酸生成的過(guò)程，其產(chǎn)生越充分，青貯的品質(zhì)就越好。乳酸菌具有較強(qiáng)的耐酸能力，在青飼料發(fā)酵過(guò)程中，同型發(fā)酵乳酸菌，如植物乳桿菌和短乳桿菌是在乳桿菌中最先出現(xiàn)，在青貯飼料中占有優(yōu)勢(shì)。其次能分解糖的梭菌，如丁酸梭菌或酪丁酸梭菌較其它梭菌更耐酸，它們可驅(qū)

3、動(dòng)后發(fā)酵，促使丁酸生成，丁酸是青貯變質(zhì)的一種重要形式。芬蘭生物化學(xué)家彼爾塔耐（“AIV法”發(fā)明者），研究發(fā)現(xiàn)甲酸的存在對(duì)青貯飼料發(fā)酵非常有益，甲酸的存在可以迅速降低pH值，從而促進(jìn)乳酸菌的繁殖，抑制有害菌的增殖，獲得優(yōu)質(zhì)青貯。綜上所述，監(jiān)控青貯發(fā)酵不同時(shí)期各酸的組成，是研究青貯飼料發(fā)酵工藝和評(píng)價(jià)青貯品質(zhì)的重要技術(shù)。脂肪酸和乳酸也作為飼料的主要酸味劑被廣泛使用[6]。它們不僅具有抑制霉菌等有害微生物增殖的作用，而且可減少動(dòng)物胃腸道中有害微生物的繁殖，同時(shí)可降低飼料pH值，激活消化酶，有助于消化吸收某些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提高飼料轉(zhuǎn)化率，以及為動(dòng)物提供能量等功能。由

4、于這些酸被完全代謝，并安全無(wú)毒而被許多國(guó)家批準(zhǔn)用于動(dòng)物飼料的日糧。因此乳酸和揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的含量及組成是判斷相關(guān)飼料品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，所以精確測(cè)定乳酸和揮發(fā)性脂肪酸（VFA）是飼料檢驗(yàn)中一項(xiàng)不可缺少的重要分析技術(shù)。目前國(guó)內(nèi)外測(cè)定乳酸和揮發(fā)性脂肪酸主要是采用氣相色譜法[9]內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))第16頁(yè)，一般方法是乳酸和揮發(fā)性脂肪酸分別測(cè)定，青貯飼料中的乳酸和揮發(fā)性脂肪酸的同時(shí)測(cè)定未見(jiàn)報(bào)道。青貯飼料是多種微生物同時(shí)發(fā)酵，干擾物質(zhì)多，分析測(cè)定難度大。所以探索一種快速簡(jiǎn)便且能同時(shí)測(cè)定青貯飼料中乳酸及揮發(fā)性脂肪酸含量的技術(shù)有著

5、非常高的實(shí)用價(jià)值。目前普遍采用直接進(jìn)樣或芐酯化法和乙酯化法處理白酒、飲料和蔬菜等樣品，前者分離效果差，乳酸峰拖尾嚴(yán)重，后者酯化試劑毒性大。我們參考了眾多資料應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)并加以改進(jìn)，采用簡(jiǎn)便的甲酯衍生化方法，利用氣相色譜填充柱，探索出一種能同時(shí)快速測(cè)定青貯飼料中的乳酸和揮發(fā)性脂肪酸（VFA）的方法。為青貯飼料的研究提供可靠的分析技術(shù)，并可以為有機(jī)酸發(fā)酵產(chǎn)品的分析測(cè)定提供參考。實(shí)驗(yàn)部分1、實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1試劑甲酸、乙酸、正丁酸、乳酸為分析純，丙酸、正戊酸、異戊酸為化學(xué)純。丙酮、二甲基甲酰胺、四甲基氫氧化銨、碘甲烷均為分析純。1.

6、1.2待測(cè)樣品內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生態(tài)學(xué)院送來(lái)檢驗(yàn)的青貯飼料，樣1為高活性6g,玉米1kg；樣2為高活性4g,玉米1kg；樣3為盛夏1.5g,玉米1kg；樣4為水分70%,玉米1kg。1.1.3儀器日本島津GC－9A型氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測(cè)器1.1.4色譜條件色譜柱：柱長(zhǎng)2m，內(nèi)徑3mm，不銹鋼柱固定相：15%的鄰苯二甲酸二壬酯與5%的吐溫－80混合固定液，擔(dān)體ChromosorbHP（80~100mesh）。內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院本科畢業(yè)論文(設(shè)計(jì))第16頁(yè)溫度：柱溫100℃,檢測(cè)器溫度：150℃。氣體流速：載氣（氮?dú)猓?0ml/min；氫氣，

7、50ml/min；空氣，500ml/min靈敏度：102進(jìn)樣量：1μl紙速：2mm/min1.2試劑配制1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制①標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的配制：取甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、正戊酸、異戊酸、乳酸試劑適量，分別用蒸餾水稀釋至20ml，待標(biāo)定。②標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的配制：取50%的氫氧化鈉水溶液8.0g于1000ml容量瓶中定容，待標(biāo)定。③標(biāo)準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)定液的配制：取適量鄰苯二甲酸氫鉀置于110℃烘箱2~3h,放入干燥器冷卻至室溫，準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5g（精確至0.0001g），加入50ml煮沸冷卻后的蒸餾水做標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)定液。④四甲基氫氧化銨溶液的配制：取10

8、g25%的四甲基氫氧化銨溶液于100ml容量瓶中定容，此溶液濃度約為0.29mol/L，備用。