植物nadph氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒

《植物nadph氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、GENMEDSCIENTIFICSINC.U.S.AGMS50096.3v.AGENMED植物NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）主要用途GENMED植物NADPH氧化酶活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用特異性抑制劑，通過反應(yīng)系統(tǒng)測定樣品中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化后峰值的降低，即采用比色法測定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）、胚胎葉（cotyledon）

2、、上胚軸（epicotyl）等還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NADPH氧化酶）的特異活性檢測。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測敏感。技術(shù)背景NADPH氧化酶，通常稱為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（reducednicotinamideadeninedinucleotidephosphateoxidase；NADPHoxidase；EC1.6.3.1）或還原型輔酶II氧化酶，是機體防御機制中的重要元素。NADPH氧化酶由6個亞體構(gòu)成：RhoGTP酶（Rhogu

3、anosinetriphosphatase）和5個phox（吞噬細胞氧化酶；phagocyticoxidase）。其中主要包含細胞膜嵌合蛋白質(zhì)分子（gp91phox、p22phox、flavocytochromeb558等），以及位在細胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)分子（p47phox、p67phox、p40phox、Rac1、Rac2等）。其最特征性的酶活性是超氧化物歧化酶敏感的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶。細胞膜上的NADPH氧化酶被激活，將還原型輔酶Ⅱ（NADPH）轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸洼o酶Ⅱ（NADP），氧分子則獲得電子形成超

4、氧陰離子O2-，由O2-又可生成H2O2和OH－。植物有氧代謝（呼吸、光合成等）過程中具有活性氧信號調(diào)節(jié)作用的NADPH氧化酶，與哺乳動物的gp91phox等同源。NADPH氧化酶在植物細胞（根部、下胚軸hypocotyl、毛狀體trichome等）生長、植物發(fā)育（尖端生長根毛tipgrowingroothairs、花粉管pollentube等）具有重要作用，同時調(diào)節(jié)細胞壁松軟、植物免疫、非生命性應(yīng)急反應(yīng)和適應(yīng)的功能?；诘孜镞€原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），在特異性抑制劑聯(lián)苯基三價碘（diphenyle

5、neiodonium；DPI）的存在下，受到NADPH氧化酶的催化作用，轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP），產(chǎn)生吸光峰值的變化，通過分光光度儀（340nm波長）檢測，來測定NADPH氧化酶的特異活性。其反應(yīng)方式為：NADPHOxidaseNADPH+O2+FAD→NADP－+FADH2+O2－產(chǎn)品內(nèi)容GENMED清理液（ReagentA）30毫升GENMED裂解液（ReagentB）5毫升GENMED緩沖液（ReagentC）20毫升GENMED反應(yīng)液（ReagentD）2.5毫升GENMED陰性液（R

6、eagentE）2毫升GENMED底物液（ReagentF）500微升GENMED專性液（ReagentG）200微升產(chǎn)品說明書1份6保存方式保存GENMED清理液（ReagentA）和GENMED陰性液（ReagentE）在4℃冰箱里，其余的保存在在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；GENMED反應(yīng)液（ReagentD）和GENMED底物液（ReagentF），避免光照，有效保證6月用戶自備15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器4℃（微型）臺式離心機：用于樣品處理恒溫培養(yǎng)箱或恒

7、溫水槽：用于反應(yīng)物孵育比色皿：用于比色測定的容器分光光度儀：用于比色分析實驗步驟實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化；GENMED反應(yīng)液（ReagentD）和GENMED底物液（ReagentF）注意避光。然后進行下列操作。一、樣品準備1．準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定1克組織重量2．（選擇步驟）放進預(yù)冷的15毫升錐形離心管3．（選擇步驟）加入3毫升GENMED清理液（ReagentA）清洗1次4．即刻用刀片切碎組織5．放進一個預(yù)冷的15毫升錐形離心管6．加入預(yù)冷的

8、1毫升GENMED裂解液（ReagentB）7．渦旋震蕩5秒，充分混勻8．即刻放進預(yù)冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）9．將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管，放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為5000g（或7500RPM，例如eppendorf5415）10．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的