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1、修改記錄單版木時間簡述A2003-11-15新發(fā)行1A2004-06-02品控部改為品質部1「…-…-一-一....染色法、培養(yǎng)基和（微生物檢驗）試劑配制作業(yè)指導書1目的對染色法、培養(yǎng)基和試劑配制方法作出明確規(guī)定，為檢測結果的準確性提供最基本的保證。2范圍適用丁微生物檢驗。3職責3.1微檢人員負責培養(yǎng)基、試劑配制。3.2微檢人員掌握微生物的染色方法。4培養(yǎng)基和試劑配制名稱、用途名稱用途4.1革蘭氏染色液微牛物染色4.2營養(yǎng)瓊脂細菌培養(yǎng)和細菌總數測定4.3孟加拉紅培養(yǎng)基霉菌、酵母菌計數4.4乳糖膽鹽發(fā)酵管大腸菌群，糞大腸菌群及人腸桿菌的測定4.5乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實試驗用4.6三糖鐵瓊脂
2、腸桿菌科細菌的生化反應篩選4.7伊紅美蘭瓊脂分離腸道致病菌。4.8緩沖蛋白腺水沙門氏菌檢驗屮的前增菌4.9四硫酸鈉煌(TTB)綠增菌液沙門氏菌檢驗中的前增菌4.10GN增菌液志賀氏菌的前增菌4.11亞硒酸鹽胱氨酸增菌液沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)4.12SS瓊脂沙門氏菌、志賀氏菌的分離4.13V-P半固體瓊脂細菌檢驗的V?P試驗4.147.5%氯化鈉肉湯金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)4.15Baird-Parker培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌的檢驗4.16酸性肉湯酸性罐頭食品商業(yè)無菌檢驗4.17尿索瓊脂基礎細菌檢驗中的尿索酶試驗4.18賴氨酸脫竣酶培養(yǎng)基細菌檢驗中的賴氨酸脫竣酶試驗4.19口引味培養(yǎng)基細菌靛基
3、質試驗，亦稱色氨酸肉湯4.20硝酸鹽氧化鉀培養(yǎng)基細菌檢驗中的硝酸鹽還原試驗和氧化鉀試驗4.21生理鹽水檢樣的溶解與稀釋5具體內容5.1革蘭氏染色法5.1.1革蘭氏染色液5.1.1.1結晶紫染色液成份：結晶紫l.Og95%乙醇20.0ml1%草酸鞍水溶液80.0ml5.1.1.2革蘭氏碘液成份：碘l.Og碘化鉀2.0g蒸憾水300.0ml5.1.1.395%乙醇5.1.1.4沙黃復染液成份：沙黃0.25g95%乙醇10.0ml蒸憾水90.0ml5.1.2染色法5.1.2.1將涂片在火焰上固定。5.1.2.2初染：滴加結品紫染色液，染lmin,水洗。5.1.2.3媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1m
4、in,水洗。5.1.2.4脫色：滴加95%乙醇脫色，水洗；或將乙醇滴滿整個涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個涂片，脫色10s,水洗。5.1.2.5復染：滴加沙黃復染液，染lmin,水洗，待干，鏡檢。5.1.2.6結果判定：革工氏陽性菌呈紫色；革工氏陰性菌呈紅色。5.2一般培養(yǎng)基和專用培養(yǎng)基5.2.1營養(yǎng)瓊脂521」用途：用于一般細菌培養(yǎng)及細菌總數測定。5.222成份(g/L)：蛋白月東10.0牛肉粉3.0氯化鈉5.0瓊脂15.0PH7.3±0.15.2.2.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121°C15min高壓滅菌備用。522.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.
5、2.2孟加拉紅培養(yǎng)基522.1用途：用于糧食、食品、飲料中霉菌、酵母菌計數。522.2成份(g/L)：蛋白月東5.0葡萄糖10.0磷酸二氫鉀1.0硫酸鎂0.5孟加拉紅0.03氯霉菌0」瓊脂15.05.2.2.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121°C20min高壓滅菌備用。522.4注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。5.2.3乳糖膽鹽發(fā)酵管523.1用途：用于大腸菌群，糞大腸菌群及大腸桿菌的測定。523.2成份(g/L)：蛋白月東20.0膽鹽3.0乳糖5.0混甲酚紫0.01PH7.4±0.1523.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝于有倒立
6、發(fā)酵管的試管中，115°C15min高壓滅菌，雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除純水外，其它成份加倍。523.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.2.4乳糖復發(fā)酵管524.1用途：供大腸菌群證實試驗用。524.2成份(g/L)：蛋白月東20.0乳糖10.0漠甲酚紫0.01PH7?4±0.15.2.4.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝10ml于有倒立發(fā)酵管的試管中，115°C15min高壓滅菌備用。524.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.2.5三糖鐵瓊脂5.2.5.1用途：主要用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選。525.2成份(g/L)：蛋白月東20.0酚紅0.025牛肉膏3.0
7、氯化鈉5.0乳糖10.0硫酸亞鐵^(6H2O)0.5蔗糖10.0硫代硫酸鈉0.5瓊脂12.0葡萄糖1.0PH7.4±0.15.2.53制法：稱取各成份溶于純水屮，加熱煮沸至溶解，分裝試管，115°C15min高壓滅菌制成高層斜而備用。525.4注意事項：保存于陰涼干燥處，密封、避光。5.2.6伊紅美蘭瓊脂526.1用途：弱選擇性培養(yǎng)基，用于分離腸道致病菌。5?2?6?2成份(g/L)：蛋白#東10.0乳糖10.0磷酸氫二
