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1、有氧訓(xùn)練對大鼠腓腸肌ChREBP及其調(diào)節(jié)因子的影響 摘要：目的：探討有氧訓(xùn)練對大鼠骨骼肌ChREBP及其調(diào)節(jié)因子PP2A、PKA、AMPK和MLx的影響。方法：20只適應(yīng)訓(xùn)練后8周齡SD大鼠隨機分為安靜組和運動組，每組10只。運動組進行35m/min、1h/d、5d/周跑臺訓(xùn)練、共訓(xùn)練4周。RQ-PCR和WB檢測PP2A、PKA、AMPK、MLx和ChREBP的基因和蛋白表達。結(jié)果：經(jīng)過4周有氧訓(xùn)練后，運動組大鼠腓腸肌PP2A、AMPKmRNA表達和AMPK、MLx蛋白表達水平顯著高于安靜組（P005）。結(jié)論：有氧訓(xùn)練通過降低CHREBP蛋白表達和通過
2、PP2A、PKA、AMPK途徑降低CHREBP活性抑制ChREBP功能，可能是有氧訓(xùn)練降低體脂的機制之一?！ ￡P(guān)鍵詞：有氧訓(xùn)練；ChREBP；PP2A；AMPK；PKA；MLx 中圖分類號：G804.7文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1006-2076（2013）05-0036-04 糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（carbohydrateresponseelementbindingprotein，ChREBP）是2001年發(fā)現(xiàn)的一種能與糖類應(yīng)答元件（carbohydrateresponseelement，ChRE）結(jié)合的蛋白質(zhì)，在哺乳動物的各種組織器官中分布廣泛，而
3、以肝臟、脂肪、小腸、腎臟和肌肉等組織中含量較多[1]。有研究顯示，肝臟中有139個基因受ChREBP11的調(diào)節(jié)，包括與糖代謝有關(guān)的丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶等，與脂肪酸合成有關(guān)的脂肪酸合酶、乙酰輔酶A羧化酶等，與甘油三酯合成有關(guān)的線粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白、三磷酸甘油脫氫酶等[2]。目前大量的研究表明，ChREBP是獨立于胰島素之外的調(diào)控糖脂代謝的重要轉(zhuǎn)錄因子，在機體能量代謝中起到非常重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。有氧訓(xùn)練是目前治療肥胖及其相關(guān)的糖尿病、脂肪肝等病癥的有效手段，涉及的研究目前多與胰島素有關(guān)，而ChREBP在其中的影響及相關(guān)機制卻鮮有報道。本研究
4、通過觀察有氧訓(xùn)練對大鼠骨骼肌中ChREBP及其調(diào)節(jié)因子蛋白磷酸酶2A（proteinphosphatase2A，PP2A）、蛋白激酶A（proteinkinaseA，PKA）、AMP活化蛋白激酶（AMPactivatedproteinkinase，AMPK）和Max樣蛋白X（Maxlikeproteinx，MLx）基因和蛋白表達的影響，為有氧訓(xùn)練改善機體糖脂代謝的機制研究提供新的實驗依據(jù)?！ ?材料與方法 1.1動物與分組 6周齡雄性SD大鼠30只，購自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2009-0002，體重160～180
5、g，分籠飼養(yǎng)，每籠5只，自由飲食，室溫23℃～25℃，濕度40%～60%，自然光照，自由飲食。定期消毒飼養(yǎng)室、用具等。所有大鼠在常氧條件下先進行2周跑臺適應(yīng)性訓(xùn)練，每天運動15min，速度從12m/min開始，逐天增加，2周后達到35m/min。動物跑臺為杭州段氏大鼠跑臺。兩周后根據(jù)大鼠體重和訓(xùn)練情況進行正態(tài)分布分組，淘汰體重過重和過輕、運動能力較差及有傷病的大鼠，保留20只進行正式實驗。20只大鼠隨機分為安靜組和運動組，每組10只。本實驗在廣州體育學(xué)院運動生物化學(xué)重點實驗室進行。 1.2訓(xùn)練方案11 訓(xùn)練組進行常氧環(huán)境下的跑臺訓(xùn)練，35m/min、
6、1h/d、5d/周[3]。安靜組正常生活，不接受跑臺訓(xùn)練，正式實驗時間為4周。 1.3標(biāo)品采集 第4周末，運動組完成最后訓(xùn)練24h后取材，安靜組同一時間取材。按0.3ml/100g體重劑量腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血，迅速分離腓腸肌，以滅菌錫紙包好在液氮中快速冷凍后保存于-80℃超低溫冰箱中?！ ?.4測試方法 1.4.1RQ-PCR測定PP2A、MLx和ChREBP基因表達 總RNA提?。阂訲rizolReagent（Invitrogen，USA）提取腓腸肌總RNA，經(jīng)紫外分光光度儀測定其OD260/OD280在1.6～1.8之
7、間，提示提取的RNA符合純度要求，可用于后續(xù)PCR?！ 》崔D(zhuǎn)錄合成模板cDNA：0.5ml去酶管中加入總RNA2μg、25×OligodT1μl、加DEPC-去離子水至13μl；850C變性5min，然后冰上放置2min以上；加入逆轉(zhuǎn)錄5×反應(yīng)緩沖液5μl，25mMdNTP1μl、25U/μlRNaseInhibitor1μl、M-MLVRTase（RNaseHfree）（GeneCopoeia，USA）1μl、ddH2O（RNase/DNasefree）4μl，總體積為25μl。混勻配制的反應(yīng)mix，短暫離心后在42℃反應(yīng)60min，再進行85℃5mi
8、n滅活處理。所得的單鏈cDNA放置于-20℃保存?！ ∫镌O(shè)計：從NCBI中查尋
