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《轉(zhuǎn)化人參皂苷rg1活性菌株鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、轉(zhuǎn)化人參皂昔Rgl活性菌株鑒定摘要：篩選長白山人參土壤中的活性微生物，轉(zhuǎn)化單體人參皂^Rglo其中菌株EST-I能將人參皂昔Rgl轉(zhuǎn)化為稀有人參皂#Flo結(jié)合菌落形態(tài)、產(chǎn)胞結(jié)構(gòu)、胞子形態(tài)特征以及菌株ITSrDNA核酸序列分析，陽性菌株EST-I被鑒定為平滑青霉Penicilliumsclerotiorum0關(guān)鍵詞：人參皂昔Rgl;人參皂昔F1；平滑青霉；生物轉(zhuǎn)化【中圖分類號IR927.2【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1674-7526(2012)12-0402-02人參及其制品中的主要活性成份是人參皂
2、昔，由于人參皂昔分子結(jié)構(gòu)中糖基側(cè)鏈的不同而顯示出不同的性質(zhì)和藥理活性[1,2]。前文主要報道了從人參根際土壤中分離得到的真菌可以將人參皂昔Rgl轉(zhuǎn)化為稀有人參皂昔Fl[3],本文對活性真菌EST-I的進行了菌種鑒定。1材料和方法1.1材料1.1.1主要試劑和儀器：引物ITS1和ITS4由上海博亞生物技術(shù)公司合成；TaqDNA聚合酶、RNaseA、DNA片段純化試劑盒購自TaKaRa公司(大連)；其他試劑均為分析純試劑。1.1.2培養(yǎng)基：①真菌分離用PDA培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基及液體轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基見文獻［3］
3、。②：真菌鑒定用察氏瓊脂培養(yǎng)基（CA）、察氏酵母浸出物瓊脂培養(yǎng)基（CYA）及麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基（MEA）參見文獻［4］。1.2菌種鑒定1.2.1形態(tài)學(xué)鑒定：采用三點接種法將陽性菌株的胞子分別接種于培養(yǎng)基（CA、CYA、MEA和PDA）上，25工倒置培養(yǎng)7d后肉眼觀察菌落特征，并采用插片培養(yǎng)法進行顯微觀察，依據(jù)參考文獻［5-7］鑒定菌株的種屬。1.2.2分子生物學(xué)鑒定：真菌染色體DNA的提取方法參見⑻。以ITS1（5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'）和ITS4（5'-TCCTCCOCTT
4、ATTGATATGC-3'）為引物，PCR擴增ITS片段的反應(yīng)采用50UL體系，反應(yīng)程序：95°C5min；95°C1min,40°C2min,72°C3min,5個循環(huán)；95°C1min,53°C2min,72°C3min,25個循環(huán)；72°C5mino0.7%瓊脂糖凝膠電泳分析擴增結(jié)果。2菌種鑒定結(jié)果1.1形態(tài)學(xué)特征：菌落形態(tài)：在CA上，菌落質(zhì)地呈黃色致密顆粒狀，胞子綠色，中央呈黃色絮狀突起，邊緣白色,背面橙紅色，邊緣白色，菌絲無色（圖略）。在CYA上，菌落質(zhì)地呈黃色顆粒狀，胞子綠色，致密，中央
5、綠色突起，具皺褶，邊緣菌絲白色，背面橙黃色，有同心輪紋，中央顏色深，呈放射狀，邊緣半透明白色菌絲，無滲泌物（圖1-A）O在MEA上，菌落質(zhì)地呈綠色致密絨狀，中央白色絮狀，邊緣黃色，氣生菌絲不繁茂，背面橙紅色，中央微凹陷，邊緣黃色（圖略）。在PDA上，菌落致密綠色絨狀，邊緣黃色，氣生菌絲不繁茂，背面橙紅色，呈輻射狀，邊緣黃色，無滲泌物（圖略）。菌絲體形態(tài)：直立分生砲子梗，分成很多的分生胞子梗，具橫隔，光滑，鞄子梗的上端產(chǎn)生對稱或不對稱的掃帚狀的分枝，在小梗頂端著生成串的分生砲子，球形，光滑（圖1-B,
6、C）o1.2ITS-5.8S序列比對：通過PCR擴增后，得到片段大小為467bp0通過Blast將所測得的序列與Genbank中的rDNA同源序列比對，從Genbank中獲得較高同源性菌株的ITS-5.8S序列，從中選擇4株ITS-5.8S序列同源的菌株，1）Penicilliumsclerotiorum2）Penicilliumherquei3）PeniciIliumadametzii,同源性均為9&1%。結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察培養(yǎng)特征，最終鑒定該真菌菌株為平滑青霉Penic訂liumsclerotior
7、um。參考文獻[1]ChenX.,ZhouQL.,WangBX.ThemetabolismofginsenosideRblbyintestinalBacteda[J].ActaPharm.Sin.1999,34（6）：410-414[2]莊毅.菌質(zhì)個中藥的新領(lǐng)域.中藥新藥與臨床藥理(TraditionalChineseDrugResearch&ClinicalPharmacology)?1992.3(2)：49-51[1]吳秀麗，張儀軒，趙文倩，王金輝，吳春福，李銃.真菌EST-I及EST-II對人
8、參皂昔Rgl定向轉(zhuǎn)化為人參皂昔F1的研究[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2008,25(1)：73-76[2]PittJI.ALaboratoryGuidetoCommonPenicilliumSpecies?Australia：CSIRODivisionofFoodResearch,1985[3]魏景超.真菌鑒定手冊.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979[4]戴芳斕.真菌的形態(tài)與分類.北京：科學(xué)出版社,1987[5]vonArxJA.Thegeneraoffungispor
