川芎藥材hplc指紋圖譜探究

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1、川葦藥材HPLC指紋圖譜探究摘要：目的建立川葦藥材的高效液相色譜指紋圖譜。方法使用色譜柱ThermoC18(250mmX4.6mm,5Pm),流動相為甲醇-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫，柱溫25°C,流速1.0mL/min,檢測波長323nm。通過提取11個色譜峰作為指紋圖譜共有峰，分別采用相似度評價，聚類分析和主成分分析等方法，對所收集的18批樣品進行系統(tǒng)比較與歸類。結(jié)果通過比較18批川葦?shù)纳V圖，確定了11個共有峰，大部分樣品的相似度在0.9以上，并將不同川葦分為3大類。結(jié)論該方法重復(fù)性好，簡便可靠，可以為川葦?shù)馁|(zhì)量控制和評價提供依據(jù)。關(guān)鍵詞：川葦；指紋圖譜；高效液相

2、色譜法中圖分類號：R284.1文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1005-5304(2014)04-0086-04川葦為傘形科植物川葦LigusticumchuanxiongHort.的干燥根莖，主要栽培于四川、云南、貴州、廣西、湖北等地。川葦始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味辛、微苦、性溫，具有活血祛瘀、行氣開郁、祛風(fēng)止痛之功，用于血瘀氣滯所致的月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)經(jīng)閉，肝郁氣滯而致血行不暢的胸脅疼痛、頭痛，風(fēng)寒濕痹、跌打腫痛等[1-2]o現(xiàn)代化學(xué)和藥理研究表明，川葦?shù)幕钚猿煞种饕〒]發(fā)油類、酚酸類和生物堿類[3-4],川葦?shù)馁|(zhì)量和道地性均與活性成分的含量和種類緊密相關(guān)。中藥質(zhì)量評價一直是中藥

3、研究與應(yīng)用中的難點與重點問題，而建立在中藥成分系統(tǒng)研究基礎(chǔ)上的中藥指紋圖譜分析是一種綜合、有效的評價手段，已成為國際公認的控制中藥或天然藥物質(zhì)量最有效的方法之一[5-8]。為了更深入地研究并揭示川葦?shù)馁|(zhì)量差異，本試驗對18個批次的川莒藥材采用高效液相色譜法（HPLC）并結(jié)合“中藥材指紋圖譜相似系統(tǒng)”和SPSS統(tǒng)計軟件進行分析，從而評價川葦藥材的質(zhì)量。1儀器與試藥美國Waterse2695高效液相色譜系統(tǒng)，包括在線脫氣機，自動進樣器ProminenceSIL-20A,二極管陣列檢測器Waters2998和柱溫箱CT0-20A；ThermoC18（250mmX4.6mm,5u

4、m）色譜柱；AnkeTGL-16C髙速離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；電子分析天平（FA1204B,上海精密科學(xué)有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-2K6,鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。阿魏酸對照品（批號110773-200611,純度±98%,中國藥品生物制品檢驗所），甲醇（色譜純，江蘇漢邦科技有限公司），純凈水（杭州娃哈哈有限公司）。川莒對照藥材（批號120927-200604,中國藥品生物制品檢驗所）。川葦藥材共18個批次，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)劉圣金老師鑒定為傘形科植物川葦LigusticumchuanxiongHort.的干燥根莖，密封保存于陰涼干燥處。樣品來源見表lo2方法

5、與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：ThermoC18(4.6mmX250mm,5Pm)；流動相：甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)；梯度洗脫:10%A(0min)?48%A(36min)?80%A(70min)；流速：1.0mL/min；檢測波長：323nm；柱溫：25°C；進樣量：10uLo2.2對照品溶液制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每1mL含阿魏酸328Pg的溶液，即得。2.3供試品溶液制備精密稱取川莒粉末2.0g,置圓底燒瓶中，加入甲醇30mL,于70°C水浴中加熱，冷凝回流提取1h,放冷，過濾,殘渣同法再提取1次，過濾，合并2次濾液，水浴揮干，用甲醇溶解并

6、定容至10mL,14000r/min離心5min,吸取上清液，過0.45?m濾膜，即得。2.4方法學(xué)考察2.4.1精密度試驗取"2.2”項下對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次10uL,考察阿魏酸色譜峰保留時間和峰面積的一致性，均RSD2.6.4主成分分析根據(jù)18批川葦樣品的HPLC指紋圖譜11個共有峰的峰面積，選取峰面積較大的主要共有峰(分別為阿魏酸及5、6、9、10、11未知成分）作為指標(biāo)，采用SPSS20.0軟件對18批川葦樣品進行主成分分析。以選取的6個主要成分的峰面積為數(shù)據(jù)源，所有數(shù)據(jù)經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化處理后，分別求得對應(yīng)于2個最大特征值的主成分PCA1（阿魏酸）和PCA2（

7、未知9號共有峰），以PCA1和PCA2建立坐標(biāo)系，進行投影。各樣本之間的距離越遠相似性越差。18批樣品可分為3類：第Ib類為樣品S3、S15、S5、S10、S12、S13、S14、S6、Sil、S7,第lib類為樣品S9、S17、S18、S8、S16、S2、S1；第Illb類為樣品S4。分類結(jié)果與聚類分析結(jié)果一致。3討論本試驗對提取溶劑甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、乙瞇進行考察，以甲醇提取的樣品色譜峰個數(shù)較多，峰型較好,峰面積較大，故提取溶劑選擇甲醇。對超聲和回流兩種不同提取方法進行比較，2種提取方法無明顯差異，故選擇回流提取